2003 Fiscal Year Annual Research Report

特異的タンパク質ノックダウン法を用いた細胞外基質と骨形成シグナルの相互作用の解析

Research Project

Project/Area Number	15659441
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	田村正人北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (30236757)
Keywords	骨形成 / 骨芽細胞 / 細胞外基質 / ノックダウン
Research Abstract	マウス頭蓋冠由来のMC3T3-E1細胞,ラット由来のROB細胞ならびにヒト骨肉腫由来株化細胞MG-63細胞を培養骨芽細胞として研究に用いた.これらの細胞を培養し,ノーザンブロット法を用い細胞接着因子のmRNA発現を検討した.いずれの細胞においてもE-カドヘリンならびにα5 integrinの発現が見られた.カドヘリンの細胞内裏打ちタンパク質であるβ-cateninの機能を調べるため,Tcf/LEF結合領域を用いたレポーター(pTOP-FLASH)をMC3T3-E1細胞にトランスフェクトした.GSK-3によりリン酸化される部位を欠失させた活性型β-cateninを同時に導入すると,ルシフェラーゼ活性は増大したが,Wnt-3aはMC3T3-E1細胞においては変化しなかった.この細胞ではWnt3aに対する反応性を欠失していると考えられた.他方,活性化していないβ-cateninやnon-canonical WntであるWnt-5aによっては,pTOP-FLASHのLuc活性は増加しなかった.これらの結果から,骨芽細胞においても,Wntのcanonical経路が存在することがわかった.University of MichiganのDr.Turnerらのグループが開発したU6プロモーターベクターを用い,α5 integrinなどのインテグリン分子群タンパク質の一部のmRNA配列の合成ヌクレオチドを挿入させたRNAi発現コンストラクトを作製した.このプラスミドをMC3T3-E1細胞にトランスフェクトさせノックダウンを行い,機能解析を行ったところ,アルカリフォスファターゼ活性の低下ならびにヒトId1遺伝子のBMP-2応答領域レポーターに対する反応性が低下し,骨芽細胞分化が抑制されることが明らかとなった.

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Tamura, M.: "Intracellular mRNA cleavage by 3´ tRNase under the direction of 2´-O-methyl RNA heptamers"Nucleic Acid Res.. 31. 4354-4360 (2003)
[Publications] Nakamura, T.: "Effects of growth/differentiation factor-5 on human periodontal ligament cells."J.Periodontal.Res.. 38. 597-605 (2003)
[Publications] Wada, K.: "Extracellular inorganic phosphate regulates gibbon ape leukemia virus receptor 2/phosphate transporter mRNA expression in rat bone marrow stromal cells"J.Cell Physiol.. 198. 40-47 (2004)
[Publications] Sato, Y.: "Enhanced cementum formation in experimentally-induced cementum defects of the root surface with the application of recombinant basic fibroblast growth factor in collagen gel in vivo."J.Periodontol.. 75. 243-248 (2004)
[Publications] Tsuji, K.: "Periodontal ligament cells under intermittent tensile stress regulate mRNA expression of osteoprotegerin and tissue inhibitor of matrix metalloprotease-1 and -2."J.Bone Mineral Metab.. 22. 94-103 (2004)
[Publications] Bandow, K.: "Hepatocyte growth factor/scatter factor stimulates migration of muscle precursors in developing mouse tongue."J.Cell Physiol.. (印刷中). (2004)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

特異的タンパク質ノックダウン法を用いた細胞外基質と骨形成シグナルの相互作用の解析

Principal Investigator

田村 正人 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (30236757)

Research Products

[Publications] Tamura, M.: "Intracellular mRNA cleavage by 3´ tRNase under the direction of 2´-O-methyl RNA heptamers"Nucleic Acid Res.. 31. 4354-4360 (2003)

[Publications] Nakamura, T.: "Effects of growth/differentiation factor-5 on human periodontal ligament cells."J.Periodontal.Res.. 38. 597-605 (2003)

[Publications] Wada, K.: "Extracellular inorganic phosphate regulates gibbon ape leukemia virus receptor 2/phosphate transporter mRNA expression in rat bone marrow stromal cells"J.Cell Physiol.. 198. 40-47 (2004)

[Publications] Sato, Y.: "Enhanced cementum formation in experimentally-induced cementum defects of the root surface with the application of recombinant basic fibroblast growth factor in collagen gel in vivo."J.Periodontol.. 75. 243-248 (2004)

[Publications] Tsuji, K.: "Periodontal ligament cells under intermittent tensile stress regulate mRNA expression of osteoprotegerin and tissue inhibitor of matrix metalloprotease-1 and -2."J.Bone Mineral Metab.. 22. 94-103 (2004)

[Publications] Bandow, K.: "Hepatocyte growth factor/scatter factor stimulates migration of muscle precursors in developing mouse tongue."J.Cell Physiol.. (印刷中). (2004)

田村正人北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (30236757)