2017 Fiscal Year Annual Research Report
Chemical Biological studies for autophagy
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15H03116
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
井本 正哉 慶應義塾大学, 理工学部(矢上), 教授 (60213253)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
斉木 臣二 順天堂大学, 医学部, 准教授 (00339996)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | オートファジー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オートファジー誘導機構の制御：東京大学・水島教授より頂いたGFP-LC3-RFP-(LC3ΔG)という新たなオートファジー測定プローブを用いて，GFP-LC3-RFPを発現させるための高タイターウイルスを完成させ，プローブを発現する細胞株を樹立した．この細胞株を384ウェルプレートに播種し，翌日，標的既知化合物ライブラリーを細胞に添加し，24時間後に細胞の蛍光像を測定した．その後，画像解析により細胞面積部分を抽出し，GFPと RFP蛍光強度を定量することでオートファジー活性を測定した．その結果を階層的クラスリングによって網羅的に解析することで，がんと神経細胞におけるオートファジーの制御機構の違いを知ることができた．また，これまでにオートファジー誘導・阻害活性の報告のない4化合物を同定した．
パーキンソン疾患治療薬シードSO286：SO286の結合タンパク質 （SOBP）の様々なドメインの欠失変異タンパク質を大腸菌に発現させて，ビオチン標識したSO286との結合実験を行った．その結果，SO286はSOBP1のN末端から182-219, 390-422,および435-470の3箇所に結合することがわかった．
オートファジー細胞死誘導物質の探索：放線菌培養液1160サンプル，化合物ライブラリー320サンプルの中から放線菌2142A-36株をヒットとして取得した．放線菌2142A-36株を大量培養し，得られた培養液をヘキサンによる脱脂後，シリカゲルクロマトグラフィー，Sephadex LH-20 Lab PacksおよびHILICのセミ分取カラムを用いて単離精製を実施した．各種スペクトル解析の結果，ヒット化合物はCholest-5-ene-3b,7a-diolであることがわかった．
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| Research Progress Status |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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