2015 Fiscal Year Annual Research Report
スプライシング因子の新規機能を利用した動物細胞ディスプレー技術の高度化
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15H04196
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
金山 直樹 岡山大学, 自然科学研究科, 准教授 (70304334)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
徳光 浩 岡山大学, 自然科学研究科, 教授 (20237077)
曲 正樹 岡山大学, 自然科学研究科, 助教 (50359882)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 抗体工学 / 細胞工学 / 変異 / SRタンパク質 / AID / DT40 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、抗体遺伝子への自発的変異能力を有するニワトリB細胞株を用いたin vitro抗体作製技術を効率化するための基盤技術を開発する。本年度は、変異導入能力を増強して抗体ライブラリー形成を効率化することにより抗体取得を効率化することを検討する。
まず、我々が体細胞高頻度突然変異に必須の因子として発見したスプライシング因子SRSF1-3の過剰発現による変異増強を試みた。SRSF1-3発現ベクターを導入した安定形質転換体において、SRSF1-3の発現が安定に維持されなかったことから、発現カセットをDT40ゲノムの特定の遺伝子座に組み込んだ細胞株を作製した。この細胞株ではSRSF1-3の発現は安定に維持され、変異能力も野生型に比べて増強することに成功した。今後、この細胞株を用いた抗体取得を試みる。さらに、SRSF1-3の機能部位に関する検討もしており、より効率の良い変異SRSF1-3を用いた細胞株も検討する。
変異導入装置の増強は、オフターゲット遺伝子への変異導入により、場合によっては遺伝毒性につながる可能性がある。したがって、変異導入装置の増強ではなく、変異導入の基質である抗体遺伝子の配列を最適化することを試みた。変異導入装置の基質特異性に沿って改変した遺伝子断片を、元の抗体遺伝子と置換したDT40細胞を作製した。今後、この細胞株を用いても変異頻度と評価し、効率的な抗体取得に応用可能かどうかを検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
おおむね研究計画に記載された検討項目を実施し、当初の目標としていた成果が得られている。
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| Strategy for Future Research Activity |
DT40細胞の変異能力増強に関してSRSF1-3過剰発現の検証し、より効果的な変異SRSF1-3の使用を検討する。
DT40細胞の変異能力増強に関してSRSF1-3過剰発現によらない方法についても検討を進める。
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