• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2016 Fiscal Year Annual Research Report

スプライシング因子の新規機能を利用した動物細胞ディスプレー技術の高度化

Research Project

Project/Area Number 15H04196
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

金山 直樹  岡山大学, 自然科学研究科, 准教授 (70304334)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 徳光 浩  岡山大学, 自然科学研究科, 教授 (20237077)
曲 正樹  岡山大学, 自然科学研究科, 助教 (50359882)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2019-03-31
Keywords抗体工学 / 細胞工学 / 変異 / SRタンパク質 / AID
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、抗体遺伝子への自発的変異能力を有するニワトリB細胞株DT40を用いたin vitro抗体作製技術を効率化するための基盤技術を開発する。本年度は、前年度に引き続き変異導入能力を増強して抗体ライブラリー形成を効率化することにより抗体取得を効率化することを検討した。
我々が体細胞高頻度突然変異に必須の因子として発見したスプライシング因子SRSF1-3の過剰発現による変異増強を試みた。これまでの検討でDT40細胞でのSRSF1-3の安定発現と変異能力の増強に成功していたが、更なる検討により、変異の標的遺伝子として初期変異導入頻度の低い遺伝子でSRSF1-3発現の効果が高い傾向にあった。また、高度に変異を増強するにはあるしきい値以上のSRSF1-3の過剰発現が必要であることを示唆する結果が得られた。この結果の一つの可能性として何らかの競合的な内在因子の可能性が示唆され、SRSF1-3の作用機序との関連から今後詳細に検討する。SRSF1-3の機能部位に関する検討により、変異導入に関与する部位を一部同定した他、SRSF1-3のAID機能への関与の検討では、SRSF1-3がAIDの局在に関与することを示唆する結果も得られた。今後は、これらのSRSF1-3機能を操作することにより効率的な変異増強方法を検討する。一方、変異導入装置の増強ではなく、変異導入の基質である抗体遺伝子の配列を変異導入装置の基質特異性に沿って最適化することを試みたが、変異導入効率に有意な差は認められなかった。この原因が、配列の最適化されていないためか、変異導入において配列の基質としての認識が律速ではないためか、などについては今後検討する。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

おおむね研究計画に記載された検討項目を実施し、当初の目標としていた成果が得られている。

Strategy for Future Research Activity

DT40細胞の変異能力増強を最適化し、抗体作製技術への応用の実証研究を実施する。

  • Research Products

    (9 results)

All 2017 2016 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (5 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] SRSF1-3 contributes to diversification of the immunoglobulin variable region gene by promoting accumulation of AID in the nucleus2017

    • Author(s)
      Yuka Kawaguchi, Hiroaki Nariki, Naoko Kawamoto, Yuichi Kanehiro, Satoshi Miyazaki, Mari Suzuki, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu, Naoki Kanayama
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      Volume: 485 Pages: 261-266

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.02.097

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Identification of striated muscle activator of Rho signaling (STARS) as a novel calmodulin target by a newly developed genome-wide screen.2016

    • Author(s)
      Yusui Furuya, Miwako Denda, Kyohei Sakane, Tomoko Ogusu, Sumio Takahashi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu
    • Journal Title

      Cell calcium

      Volume: 60 Pages: 32-40

    • DOI

      http://dx.doi.org/10.1016/j.ceca.2016.04.004

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Differential AMP-activated Protein Kinase (AMPK) Recognition Mechanism of Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase Kinase Isoforms.2016

    • Author(s)
      Yuya Fujiwara, Yoshinori Kawaguchi, Tomohito Fujimoto, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu
    • Journal Title

      The Journal of biological chemistry

      Volume: 291 Pages: 13802-13808

    • DOI

      http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M116.727867

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割2016

    • Author(s)
      梶浦 雄也、金廣 優一、有年 由貴子、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
    • Organizer
      第39回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-12-02
  • [Presentation] 抗体遺伝子変異における転写依存性過程におけるSRSF1-3の役割の解析2016

    • Author(s)
      川口 祐加、横山 和輝、河本 奈緒子、成木 弘明、松山 雄磨、金廣 優一、曲 正樹、大森 斉、徳光 浩、金山 直樹
    • Organizer
      第39回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-12-02
  • [Presentation] 抗体遺伝子高頻度突然変異におけるssDNA形成へのSRSF1-3の関与の解析2016

    • Author(s)
      横山 和輝、川口 祐加、松山 雄磨、河本 奈緒子、成木 弘明、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
    • Organizer
      第39回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-12-02
  • [Presentation] SRSF1-3の高度保存領域が抗体遺伝子変異に寄与する2016

    • Author(s)
      成木 弘明、川口 祐加、宮崎 誠士、河本 奈緒子、横山 和輝、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
    • Organizer
      第39回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-12-02
  • [Presentation] スプライシング因子過剰発現による B 細胞株における抗体遺伝子変異の増強2016

    • Author(s)
      太田 愛美, 西山 由美子, 清木 俊雄, 植月 英智, 川口 祐加, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹
    • Organizer
      第68回 日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      富山国際会議場(富山県富山市)
    • Year and Date
      2016-09-29
  • [Remarks] http://www.okayama-u.ac.jp/user/saibou/index.html

URL: 

Published: 2018-01-16  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi