2016 Fiscal Year Annual Research Report
分裂期チェックポイントを利用した２１トリソミー治療法の開発
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15H04321
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
松浦 伸也 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (90274133)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮本 達雄 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 講師 (40452627)
柳原 啓見 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (50719474)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 染色体 / 遺伝病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ダウン症の２１トリソミーを培養細胞レベルで正常化させるトリソミー治療法が注目されている。本申請研究では、新しい概念を取り入れたトリソミー治療法を提案する。すなわち、ダウン症細胞の分裂期チェックポイントを人工的に抑制して染色体不安定性を一過性に誘導し、この中から過剰２１番染色体のみ喪失した細胞を選別する手法である。本法は簡易かつ細胞およびゲノムに低侵襲であり、より安全な染色体治療法として２１トリソミーのみならず様々な染色体異常症に応用できる可能性がある。
本年度は、BUBR1が欠損したPCS症候群の患者由来iPS細胞を用いて染色体数の分布（異数性）を観察した。その結果、BUBR1の発現を相補すると、患者細胞の染色体不安定性は回復するが、核型異常までは正常化されないことが判明した。さらに正常細胞を用いて、ライブセルイメージング手法により２１番染色体と１８番染色体の検出を試みた。具体的には、２１番染色体および１８番染色体に特異的なリピートを標的とするCRISPR/Cas9を作成して、GFPと連結してU2OS細胞に導入した。その結果、２１番染色体または１８番染色体のいずれもリアルタイムで観察された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画のとおり、２１番染色体と１８番染色体のライブセルイメージングに成功した。
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| Strategy for Future Research Activity |
２１番または１８番染色体を認識するdCas9-GFPを、それぞれ２１トリソミーおよび１８トリソミーのiPS細胞に導入して、細胞クローンを単離する。この細胞にBUBR1 siRNAを導入して、染色体のコピー数を観察し、染色体数が正常化する瞬間を観察する。
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Research Products
(9 results)
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[Journal Article] Functional consequence of fibulin-4 missense mutations associated with vascular and skeletal abnormalities and cutis laxa2016
Author(s)
Sasaki T, Hanisch FG, Deutzmann R, Sakai LY, Sakuma T, Miyamoto T, Yamamoto T, Hannappel E, Chu ML, Lanig H, von der Mark K
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Journal Title
Matrix Biol
Volume: 56
Pages: 132-149
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Presentation] A combined approach of exome sequencing and genome editing identified WDR62/MCPH2 mutations in patients with primary microcephaly2016
Author(s)
Tatsuo Miyamoto, Yoshinori Masatsuna, Akihiro Fukumitsu, Silvia Natsuko Akustu, Kosuke Hosoba, Hiroyuki Morino, Hideshi Kawakami, Takashi Yamamoto, Kenji Shimizu, Hirofumi Ohashi, Shinya Matsuura
Organizer
ASHG2016 (Vancouver)
Place of Presentation
Vancouver（カナダ）
Year and Date
2016-10-18 – 2016-10-22
Int'l Joint Research
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