2016 Fiscal Year Annual Research Report
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15H04330
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
升方 久夫 大阪大学, 理学研究科, 教授 (00199689)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 複製開始 / テロメア / 核内局在 / 細胞周期 / 分裂酵母 / クロマチン / Taz1 / Rif1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【１】複製開始点活性化タイミング制御における核内局在の役割解明：分裂酵母を用いて複製タイミング制御と核内局在の関連を明らかにするため、初期ならびに後期複製開始点３個所と初期開始点の近傍にlac0リピートを組み込み、LacI-GFPのシグナルを高解像度顕微鏡で解析した。核膜ならびにテロメアとの相対位置をそれぞれIsh1-mCherry とTaz1-mCherryで検出し、統計的解析を行った結果、Taz1依存的後期開始点は細胞周期を通じて核膜内縁に局在しG1-S期特異的にテロメアに隣接を示した。これらの局在は、複製タイミング制御に必要な、複製開始近傍のテロメア配列、Taz1, Rif1に依存した。いっぽうRif1依存的後期開始点や初期開始点は上記の局在を示さなかったことから、これらの後期開始点特異的局在は、複製タイミング制御に重要であると考えられる。
【２】テロメア結合因子Rif1の機能解析：1400アミノ酸からなるRif1の部分断片を公募Two-hybrid系を用いて、Taz1あるいはRif1同士の相互作用に必要な領域を限定し、点突然変異を導入してTaz1との相互作用の欠損変異を分離した。
【３】複製開始因子Sld3の機能解析：S期での複製開始点活性化過程で最初に結合する重要因子であるSld3のN末100アミノ酸領域がSld3同士の結合に必要であり、効率よい複製開始に重要であることを見いだした（遺伝研、田中誠司博士と共同研究）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
複製タイミング制御に関しては、後期複製開始点特異的な核内局在を同定し、テロメア因子への依存性など多くの新たな知見が得られた点で大きく進捗し、論文投稿準備中である。また、Rif1の機能ドメインを限定し、それぞれの機能と複製開始制御ならびに核内局在での役割を解析中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
後期複製開始点が核膜ならびにテロメアへの隣接することがタイミング制御に必要であるか、あるいは核内局在と複製タイミング制御には直接の因果関係がないのかを明らかにすることが重要と考えており、複製開始点をテロメア近傍に人為的に繋ぎとめる（tether）する実験系を構築中である。これにより因果関係を明らかにしたい。今年度中に評価の高い雑誌に掲載を目指す。
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[Journal Article] Rad51 and Rad54 promote noncrossover recombination between centromere repeats on the same chromatid to prevent isochromosome formation.2016
Author(s)
Onaka, AT., Toyofuku, N., Inoue, T., Okita, AK., Sagawa, M., Su, J., Shitanda, T., Matsuyama, R., Zafar, F., Takahashi, TS., Masukata, H., Nakagawa, T.
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Journal Title
Nucleic Acids Research
Volume: 44 (22)
Pages: 10744-10757
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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