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2016 Fiscal Year Annual Research Report

固体NMRによる光受容蛋白質ロドプシンのレチナール結合部位の精密構造解析法の開発

Research Project

Project/Area Number 15H04336
Research InstitutionYokohama National University

Principal Investigator

川村 出  横浜国立大学, 大学院工学研究院, 准教授 (20452047)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 五東 弘昭  横浜国立大学, 大学院工学研究院, 准教授 (80635235)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords固体NMR / レチナール / 膜タンパク質
Outline of Annual Research Achievements

レチナール結合型タンパク質は光を吸収して、発色団レチナールが異性化し、タンパク質構造変化によって機能する。そのためレチナールとタンパク質の間の相互作用は機能を制御する上で極めて重要な部分である。そのような反応中心の構造を理解するために、固体NMRを用いたレチナールおよびその周辺残基を含めたレチナール結合ポケットの精密な構造解析法の開発を進めている。本年度は、レチナール結合部分の固体NMR構造解析法の開発とレチナール誘導体の変換法の構築を行なった。レチナールとの相互作用を見るためにいくつかの微生物型ロドプシンに空間的な原子間距離に基づいた測定法を適用し、レチナール結合部位選択的に信号を観測することに成功した。極大吸収波長と化学シフトの相関関係、近傍Tyrの水素結合とロドプシンの機能のタイプとの相関、周辺アミノ酸残基との相互作用が発色団の配座に及ぼす影響などを検討することができた。さらに、安定同位体標識戦略などを再検討することができ、新たなNMR実験計画を考案することができた。また、研究分担者の五東准教授と引き続き協力して研究を進め、レチナール誘導体の変換法として、マイクロリアクターを利用した反応系を構築し、モデル化合物で効率的かつ選択的に進行することを証明した。この反応系は次年度の研究の推進に重要なものである。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

レチナールと周囲のアミノ酸の相互作用の観測に成功し、NMR情報からわかる機能との関係を示した(I. Kawamura, et al. A. Shigeta et al. (2017) Biochemistry)。また、特にロドプシンタンパク質の構造解析に有効な光照射-固体NMRの研究を2つの著書にまとめてきた。マイクロリアクターなどを用いた実験系を構築し、非標識レチナールオキシムをもとにしたレチナール誘導体からレチナールへの変換反応について、その効率を向上させることに成功した。

Strategy for Future Research Activity

固体NMR測定による13C-13C双極子相互作用を利用した膜タンパク質内部の発色団の二面角の解析など固体NMRの実験計画は引き続き進めていく。高度好塩菌培養過程でセグメント標識レチナールを抽出することは難しい状態であるため、すでに微生物型ロドプシンに埋め込まれているレチナール誘導体として抽出し、それを再変換する反応系の構築に研究計画を変更する。これにより、微生物型ロドプシンにおけるレチナール-タンパク質間相互作用の固体NMR解析を網羅的に実施するために、大腸菌発現系のロドプシンに適用できるようなレチナール誘導体-レチナール変換反応系を構築し、研究を進めていく。

  • Research Products

    (27 results)

All 2017 2016 Other

All Journal Article (4 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 4 results,  Acknowledgement Compliant: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (19 results) (of which Int'l Joint Research: 8 results,  Invited: 3 results) Book (3 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Solid-state NMR structural study of retinal-binding pocket in sodium ion pump rhodopsin.2017

    • Author(s)
      Arisu Shigeta, Shota Ito, Keiichi Inoue, Takashi Okitsu, Akimori Wada, Hideki Kandori, Izuru Kawamura*
    • Journal Title

      Biochemistry

      Volume: 56 Pages: 543-550

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.6b00999

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Solid State VCD spectra of Isoleucine and its Related Compounds: Effects of Interplay between Two Chiral Centers.2017

    • Author(s)
      Hisako Sato*, Izuru Kawamura, Akihiko Yamagishi, Fumi Sato
    • Journal Title

      Chemistry Letters (Editor's choice)

      Volume: 46 Pages: 449-452

    • DOI

      http://dx.doi.org/10.1246/cl.161043

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Dynamic Structure and Orientation of Melittin Bound to Acidic Lipid Bilayers, as Revealed by Solid-State NMR and Molecular Dynamics Simulation2017

    • Author(s)
      Kazushi Norisada, Namsrai Javkhlantugs, Daisuke Mishima, Izuru Kawamura, Hazime Saito, Kazuyoshi Ueda*, and Akira Naito*.
    • Journal Title

      J. Phys. Chem. B

      Volume: 121 Pages: 1802-1811

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.6b11207

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Magnetically Alignable Bicelles with Unprecedented Stability Using Tunable Surfactants Derived from Cholic Acid2016

    • Author(s)
      Ryoichi Matsui, Noriyuki Uchida, Masataka Ohtani, Kuniyo Yamada, Arisu Shigeta, Izuru Kawamura, Takuzo Aida, Yasuhiro Ishida*
    • Journal Title

      ChemPhysChem

      Volume: 17 Pages: 3916-3922

    • DOI

      10.1002/cphc.201600897

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 固体NMRを用いた機能性分子液体の構造解析2017

    • Author(s)
      川村 出
    • Organizer
      「機能性液体」に関する研究会
    • Place of Presentation
      物質・材料研究機構並木地区
    • Year and Date
      2017-02-20 – 2017-02-20
    • Invited
  • [Presentation] Structural change in retinal- and sodium ion-binding site of Na+ pump rhodopsin at neutral and acidic pH studied by solid-state NMR2017

    • Author(s)
      A. Shigeta, S. Ito, K. Inoue, T. Okitsu, A. Wada, H. Kandori, I. Kawamura
    • Organizer
      The 7th Asia-Pacific NMR Symposium,
    • Place of Presentation
      Indian Institute of Science, Bangalore
    • Year and Date
      2017-02-16 – 2017-02-19
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 固体NMRを用いたミドルロドプシンのレチナール結合ポケットの構造解析2016

    • Author(s)
      I. Kawamura, H. Seki, A. Shigeta, Y. Makino, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo
    • Organizer
      第54回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-25 – 2016-11-27
  • [Presentation] In situ光照射固体NMRによるセンサリーロドプシンIIの光中間体の解析2016

    • Author(s)
      Y. Makino, I. Kawamura, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo, N. Kamo, A. Naito, K. Ueda.
    • Organizer
      第54回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-25 – 2016-11-27
  • [Presentation] 酸性および中性におけるナトリウムイオンポンプKR2のレチナール結合ポケットの固体NMR構造解析2016

    • Author(s)
      A. Shigeta, S. Ito, T. Okitsu, A. Wada, K. Inoue, H. Kandori, I. Kawamura
    • Organizer
      第54回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-25 – 2016-11-27
  • [Presentation] 固体NMRによるバクテリオロドプシンの暗順応状態におけるTyr185の構造解析2016

    • Author(s)
      Y. Otani, A. Shigeta, Y. Kebukawa, K. Kobayashi, T. Okitsu, A. Wada, S. Tuzi, A. Naito, I. Kawamura
    • Organizer
      第54回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-25 – 2016-11-27
  • [Presentation] In-situ光照射固体NMRによるバクテリオロドプシンD96N変異体の光反応過程でのレチナールおよびタンパク質構造変化の解析2016

    • Author(s)
      大谷優人、重田安里寿、槙野義輝、宮佐亮太、川村出、沖津貴志、和田昭盛、辻暁、内藤晶
    • Organizer
      第55回NMR討論会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-16 – 2016-11-18
  • [Presentation] 固体NMRによる光駆動型ナトリウムイオンポンプKR2のpH変化に対するレチナール結合サイトの構造変化の解析 (大陽日酸賞受賞)2016

    • Author(s)
      重田安里寿、伊藤奨太、沖津貴志、和田昭盛、井上圭一、神取秀樹、川村出
    • Organizer
      第55回NMR討論会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-16 – 2016-11-18
  • [Presentation] 固体NMRを用いたミドルロドプシンの温度変化に対する構造変化の解析2016

    • Author(s)
      川村出、関隼斗、重田安里寿、沖津貴志、和田昭盛、須藤雄気
    • Organizer
      第55回NMR討論会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-16 – 2016-11-18
  • [Presentation] 光照射固体NMRによるセンサリーロドプシンIIの光反応過程における光中間体構造の解析2016

    • Author(s)
      槙野義輝、川村出、沖津貴志、和田昭盛、須藤雄気、加茂直樹、内藤晶
    • Organizer
      第55回NMR討論会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-16 – 2016-11-18
  • [Presentation] 固体NMRの基礎2016

    • Author(s)
      川村出
    • Organizer
      第28回NMR講座 NMR研究会 (高分子学会)
    • Place of Presentation
      東京海洋大学
    • Year and Date
      2016-10-14 – 2016-10-14
    • Invited
  • [Presentation] Structural analysis of retinal binding pocket of sodium pumping rhodopsin, KR2, studied by solid-state NMR (Oral)2016

    • Author(s)
      A. Shigeta, S. Ito, T. Okitsu, A. Wada, K. Inoue, H. Kandori, I. Kawamura
    • Organizer
      17th International Conference on Retinal Proteins (ICRP2016)
    • Place of Presentation
      Neues Palais, Potsdam
    • Year and Date
      2016-10-02 – 2016-10-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Solid-state NMR structural study of Tyr residue in the retinal binding-pocket of microbial rhodopsins (Oral).2016

    • Author(s)
      I. Kawamura, R. Nishikawa, H. Seki, A. Shigeta, Y. Makino, T. Tsukamoto, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo, A. Naito.
    • Organizer
      17th International Conference on Retinal Proteins (ICRP2016)
    • Place of Presentation
      Neues Palais, Potsdam
    • Year and Date
      2016-10-02 – 2016-10-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Conformational changes in retinal of sensory rhodopsin as revealed by in-situ photo-irradiation solid-state NMR and chemical shift calculation2016

    • Author(s)
      Y. Makino, I. Kawamura, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo, N. Kamo, Y. Sudo, A. Naito, K. Ueda
    • Organizer
      17th International Conference on Retinal Proteins (ICRP2016)
    • Place of Presentation
      Neues Palais, Potsdam
    • Year and Date
      2016-10-02 – 2016-10-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Solid-state NMR structural study of photoreceptor membrane protein2016

    • Author(s)
      I. Kawamura
    • Organizer
      第65回高分子討論会 (日韓合同セッション)
    • Place of Presentation
      神奈川大学
    • Year and Date
      2016-09-14 – 2016-09-16
    • Invited
  • [Presentation] Structural analysis of retinal binding pocket of sodium pumping rhodopsin, KR2, by solid-state NMR (Young Investigator Award)2016

    • Author(s)
      A. Shigeta, S. Ito, T. Okitsu, A. Wada, K. Inoue, H. Kandori, I. Kawamura
    • Organizer
      XXVIIth International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems (ICMRBS2016)
    • Place of Presentation
      京都国際会議場
    • Year and Date
      2016-08-21 – 2016-08-26
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Structural change of Tyr185 in the vicinity of the retinal chromophore in bacteriorhodopsin by 13C solid-state NMR2016

    • Author(s)
      Y. Otani, A. Shigeta, Y. Kebukawa, K. Kobayashi, T. Okitsu, A. Wada, S. Tuzi, A. Naito, I. Kawamura
    • Organizer
      XXVIIth International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems (ICMRBS2016)
    • Place of Presentation
      京都国際会議場
    • Year and Date
      2016-08-21 – 2016-08-26
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Structural changes of retinal in sensory rhodopsin II as revealed by in-situ photo-irradiation solid-state NMR2016

    • Author(s)
      Y. Makino, I. Kawamura, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo, N. Kamo, A. Naito, K. Ueda
    • Organizer
      XXVIIth International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems (ICMRBS2016)
    • Place of Presentation
      京都国際会議場
    • Year and Date
      2016-08-21 – 2016-08-26
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Structure of retinal-binding pocket of microbial rhodopsin as revealed by solid-state NMR2016

    • Author(s)
      I. Kawamura, R. Nishikawa, H. Seki, A. Shigeta, Y. Otani, S. Nakatani, Y. Makino, T. Okitsu, A. Wada, Y. Sudo, A. Naito
    • Organizer
      XXVIIth International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems (ICMRBS2016)
    • Place of Presentation
      京都国際会議場
    • Year and Date
      2016-08-21 – 2016-08-26
    • Int'l Joint Research
  • [Book] Modern Magnetic Resonance2017

    • Author(s)
      Akira Naito*, Yoshiteru Makino, Izuru Kawamura
    • Total Pages
      印刷中
    • Publisher
      Springer
  • [Book] Experimental Approaches of NMR spectroscopy2017

    • Author(s)
      Akira Naito*, Yoshiteru Makino, Yugo Tasei, Izuru Kawamura
    • Total Pages
      Chap. 6 印刷中
    • Publisher
      Springer
  • [Book] Experimental Approaches of NMR spectroscopy2017

    • Author(s)
      Izuru Kawamura*, Kazushi Norisada, Akira Naito
    • Total Pages
      Chap. 10 印刷中
    • Publisher
      Springer
  • [Remarks] 横浜国立大学 研究者総覧

    • URL

      http://er-web.jmk.ynu.ac.jp/html/KAWAMURA_Izuru/ja.html

URL: 

Published: 2018-01-16  

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