2016 Fiscal Year Annual Research Report
脂質センサー型ITAM受容体による抗酸菌特異的脂質の認識と結核病態の制御
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15H04729
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
原 博満 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (20392079)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 感染症 / 抗酸菌 / 免疫学 / 結核 / 脂質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）Mincle, Trem2を介した自然免疫応答の結核防御における役割
Trem2欠損がMincle応答を増強する機構を検討するため、Trem2-DAP12キメラ分子とMincle-FiRgキメラ分子あるいはそのITAMモチーフのY/F変異体を発現するNFATレポーター細胞を作成し、Mincle及びTrem2リガンド刺激有無でのMincleシグナルの活性化をNFATシグナルを指標に解析した。しかし、使用したT細胞株を用いたレポーター細胞システムではTrem2によるMincleシグナルの抑制作用は認められなかった。同様の結果が、Trem2を欠損した樹状細胞でも観察されたため、Trem2によるMincleの抑制効果は細胞種特異的（Mφ特異的）である可能性が示唆された。野生型及びTrem2欠損マウスへのBCG tokyo株の腹腔内感染を行い、Trem2のBCG感染防御における役割を検討した結果、Trem2KOマウスではBCG菌の排除が促進されることが判った。すなわち、Trem2を介したシグナルがBCGに対する感染防御応答を負に制御していることが示唆された。
（２）PGLRの機能解析
PGLRのPGL陽性菌に対する応答を調べるため、PGL陽性BCGワクチン株（Tokyo株TypeI、Russia株, Pasteur株）と陰性コントロールとなるPGL陰性株（Tokyo株TypeII、Moreau株）、さらにPGL陽性の結核菌北京株（HN878）とそのPGL欠損株を入手したが、各種PGL陽性株の培養後にPGLの産生が十分に検出できなかったため、PGLを高産生する至適培養条件の検討を開始した。
（３）CD1b拘束性T細胞活性化における脂質認識受容体の役割の検討
ミコール酸反応性T細胞株DN1からTCRをクローニングし、CD1b拘束性にMAに反応するJurkat株の樹立に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
PGLRの機能解析のために入手したPGL陽性のBCG菌株及び結核菌株を入手したが、研究代表者の研究室で通常行なっている7H9培地を使用した液体震盪培養の条件では十分なPGL産生が得られなかった。そのため、PGLを産生させるための培地条件や、培養条件の検討を始め、依然至適条件の模索中である。この材料調製が遅れているため、PGLRの機能解析に関する研究が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
（１）Mincle, Trem2を介した自然免疫応答の結核防御における役割
これまで得られたデータをまとめて論文投稿の準備を始めるとともに、Trem2によるMincle応答抑制のメカニズム解明を進める。
（２）PGLRの機能解析
PGL陽性の抗酸菌の至適培養条件を決定し、これらPGL陽性菌やPGL陰性菌（あるいはPGL欠損変異株）を用いてin vitroでのMφ感染試験を行う。また、PGLを大量に精製し、野生型及びPGLR欠損マウスへの投与試験を行ない、惹起される炎症応答を調べることで、in vivoにおけるPGLRの役割について解析を行う。
（３）CD1b拘束性T細胞活性化における脂質認識受容体の役割の検討
ミコール酸に結合するITAM共役受容体（Trem2やMincle）を欠損するMφ細胞株を樹立し、ミコール酸反応性Jurkat株の刺激能を野生型株と比較することで、これら受容体の役割を解析する。
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