2016 Fiscal Year Annual Research Report
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15H04747
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
堀 昌平 東京大学, 大学院薬学系研究科(薬学部), 教授 (50392113)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 免疫寛容 / 自己免疫疾患 / 制御性T細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は、ヒト自己免疫疾患IPEXにおいて同定されているFoxp3遺伝子変異(A384T)が非リンパ組織における制御性T細胞(Treg)の恒常性と機能を特異的に障害して自己免疫疾患を惹起することを見いだし、A384T Tregの組織環境における適応破綻は転写因子BATFの発現抑制に起因することを明らかにした。本研究は、Foxp3とBATFが組織環境、炎症環境におけるTregの適応性を制御する内因的、外因的メカニズムを解明することを目的とし、本年度は主に以下の研究項目につき研究を進めた。
1. A384T変異体によるBATF発現抑制メカニズムとその意義：レポーターアッセイにおいてA384TによるBatfプロモーター活性の抑制に必要なforkhead認識サイト2カ所を同定した。そして、それらサイトの変異マウスをCRISPR/Cas9システムにより作製し、founderマウスを得た。また、ROSA26-STOP-BATFマウスを作製し、Foxp3-iCre BACトランスジェニックマウスと交配させてTreg特異的にBATFを発現させるマウスを得た。野生型マウスにおいてエフェクター・メモリー型Tregが増加することがわかった。
2. TregにおけるBATFの生理的意義：Treg特異的BATF欠損マウスが致死性の自己免疫疾患を発症し、組織にTh1とTh2細胞が選択的に蓄積すること、エフェクター・メモリー型Tregが選択的に欠損することがわかった。
3. TregサブセットにおけるFoxp3結合サイトの解析：Tregをナイーヴ型とエフェクター・メモリー型サブセットに分けてFoxp3 ChIP-seq解析を行った結果、それぞれのサブセットに特異的な結合サイトが同定された。そして、ナイーブ型特異的結合サイトにはFoxp1の共局在が、エフェクター・メモリー型特異的結合サイトにはIRF4の共局在が見られたことから、Foxp3は両者においてpartnerを変えることによりゲノム上異なった場所に結合してそれぞれの遺伝子発現を制御すると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ほぼすべての研究項目について、当初計画していた通り順調に進展している。A384T変異体によるBatf発現抑制メカニズムの解析に関しては、当初予想していた仮説（A384T変異体による他のFKH転写因子の結合障害）を支持する結果は得られなかったため、仮説の再検討が必要であったが、その点については今後の検討課題である。
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| Strategy for Future Research Activity |
内因性メカニズムに関しては、A384TによるBatf発現抑制のメカニズムと意義を明らかにすることと、BATFによるエフェクター・メモリー型Tregの分化と組織における集積メカニズムを検討することが重要である。これまでの研究から、Foxp3, BATF, IRF4が協調的に遺伝子発現を制御し、エフェクター・メモリー型Tregの分化と組織への集積を制御するというモデルが考えられた。今年度、このモデルの検証を行いたい。外因性メカニズムに関しては、組織におけるTregの表現型は組織樹状細胞との相互作用により制御されるという仮説を検証する。
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[Presentation] 制御性T細胞とアレルギー2016
Author(s)
堀昌平
Organizer
日本アレルギー学会 第3回総合アレルギー講習会
Place of Presentation
パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
Year and Date
2016-12-17 – 2016-12-18
Invited
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