2015 Fiscal Year Annual Research Report
神経筋接合部の正常分子構築解明と先天性筋無力症候群の分子病態研究
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15H04840
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
大野 欽司 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80397455)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 先天性筋無力症候群 / 神経筋接合部 / RSPO2 / LGR5 / agrin |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Wntリガンドが胎生期におけるアセチルコリン受容体(AChR)のクラスタリングに重要であることが知られてきたがそのシグナル伝達に関わる分子は十分に解明されていない。マウス脊髄前角細胞のレーザーキャプチャーマイクロダイセクションサンプルをマイクロアレイならびにRNA-seqにより解析を行い網羅的な遺伝子発現を調べた。脊髄前角細胞特異的に発現する複数の遺伝子を同定し、Wntシグナルを制御することが知られている細胞外分泌タンパクRspo2に着目して解析を行った。C2C12筋芽細胞に対するRspo2の付加ならびにsiRNAによるRspo2のノックダウン、並びに、Rspo2ノックアウトマウスの解析にてRspo2はWntを介するAChRクラスタリングに必須の分子であり、agrinとは独立してagrinの80%のAChRクラスタリング活性を有することを明らかにした。さらにRspo2の筋終板受容体がLgr5であることを明らかにし、Rspo2とLgr5がagrin/Lrp4/MuSKに次ぐ重要なAChRクラスタリング誘導因子であることを明らかにした。先天性筋無力症候群のexome capture resequencing解析, whole genome resequencing解析においてRSPO2とLGR5を候補遺伝子として解析を行ったが、いずれの遺伝子にも変異は存在しなかった。
先天性筋無力症候群の新規遺伝子変異の検索をexome capture resequencing解析, whole genome resequencing解析により行い、新規遺伝子変異の機能解析を開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法により前角細胞特異的に発現をする遺伝子の網羅的な解析により、Rspo2がagrinに次ぐ重要な脊髄前角細胞由来細胞外分泌タンパクを同定した。同時にその受容体がLGR5であることを同定した。研究は計画通り進捗している。
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| Strategy for Future Research Activity |
先天性筋無力症候群のexome capture resequencing解析、whole genome resequencing解析をさらに多くの症例で行い、新規原因遺伝子の同定を進める。脊髄前角細胞特異的に発現をする遺伝子群の中に２つの新規AChR誘導分子を同定し解析を開始した。RiboTagマウスを用いて脊髄前角細胞特異的ならびに筋終板特異的に発現する遺伝子の網羅的な解析を開始した。 これらの解析によりさらなる神経筋接合部構成分子の解析ならびに先天性筋無力症候群病態における役割を明らかにする。
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[Journal Article] LRP4 third beta-propeller domain mutations cause novel congenital myasthenia by compromising agrin-mediated MuSK signaling in a position-specific manner2015
Author(s)
Ohkawara B, Cabrera-Serrano M, Nakata T, Milone M, Asai N, Ito K, Ito M, Masuda A, Ito Y, Engel AG, Ohno K.
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Journal Title
Hum Mol Genet
Volume: 23
Pages: 1856-1868
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] A missense mutation in domain III in HSPG2 in Schwartz-Jampel syndrome compromises secretion of perlecan into the extracellular space2015
Author(s)
Iwata S, Ito M, Nakata T, Noguchi Y, Okuno T, Ohkawara B, Masuda A, Goto T, Adachi M, Osaka H, Nonaka R, Arikawa-Hirasawa E, Ohno K.
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Journal Title
Neuromuscul Disord
Volume: 25
Pages: 667-671
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Collagen Q and anti-MuSK autoantibody competitively suppress agrin/LRP4/MuSK signaling2015
Author(s)
Otsuka K, Ito M, Ohkawara B, Masuda A, Kawakami Y, Sahashi K, Nishida H, Mabuchi N, Takano A, Engel AG, Ohno K.
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 5
Pages: 13928
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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