2015 Fiscal Year Annual Research Report
FAPの次世代型複合的免疫療法によるアミロイド掃討作戦
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15H04841
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
安東 由喜雄 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (20253742)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
池田 徳典 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (00613530)
田崎 雅義 熊本大学, 大学院生命科学研究部(保), 助教 (50613402)
植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885)
三隅 洋平 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (80625781)
山下 太郎 熊本大学, 医学部附属病院, 特任教授 (90381003)
大林 光念 熊本大学, 大学院生命科学研究部(保), 教授 (90361899)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 神経科学 / 家族性アミロイドニューロパチー / トランスサイレチン / 抗体治療 / 免疫療法 / iPS細胞 / 神経分子病態学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
免疫療法の標的抗原の探索
1. 立体構造情報から予測される抗原部位のペプチド合成：TTR四量体構造から単量体、ミスフォールディングTTR、オリゴマー、アミロイド線維と変化する過程で、内部から外部へ露出すると予測される部位のペプチドを合成し各種免疫療法の抗原とする。これまでに、C末端側であるTTR115-124に対する抗体はintactなTTR四量体では内部に位置するため反応せず、アミロイド線維化すると外部へ露出するため反応することが判明しており抗原部位の候補となる。本研究では、TTR115-124に加えて他の部位でも同様にペプチドを合成し、更に理想的な抗原部位を探索した。
2. リコンビナント蛋白質を用いた標的抗原の探索：大腸菌で作成した変異型（Val30Met）TTRを酸性条件下でインキュベーションしTTRを変性・アミロイド線維化させる。本過程で様々な形態の変性TTR、オリゴマーなどが形成されるため、HPLC（ゲル濾過カラム）を用いて分子サイズにより分取した。さらに異なった症状のFAP(劇症型、髄膜型、心臓型など)の原因となる各種の変異体TTR（Leu55Pro、Tyr114Cys、Ser50Ileなど）を用いて同様の検討を行った。
3. FAP患者組織から抽出・分離・精製した抗原：FAP患者の剖検凍結組織をホモジネートしPras法でアミロイド線維を抽出した。この過程で得られる可溶性の分画もストックし、HPLC法で分取後にTTRオリゴマーの検出した。得られた各種のTTR形態を精製後に抗原として用いた。
解析の結果、TTR115-124はTTRがアミロイドになる折に確かにcryptic epitopeになることが確認されたが、加えて、TTR88-96も同様の抗原になることが新たに判明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
TR115-124はTTRがアミロイドになる折に確かにcryptic epitopeになることが確認されたが、加えて、TTR88-96も同様の抗原になることが新たに判明したが、両者とも確かにこれまでのpreliminaryなin vitroの研究においてアミロイド化を著明に抑えることが判明している。これまでの化血研との共同研究に加えて、アメリカのベンチャー企業であるProthena社とも共同研究を開始しており、今年度予定しているiPS―マクロファージの研究を行いながら、FAP患者に対する応用を目指して、確実に前に進んでいる。
現在までのところ要所の予想通りに研究は進展しており、あらたな研究の変更はない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成28年度はTTR115-124に加えて、TTR88-96も候補に加えて実験を展開する。またiPS-MΦを用いた細胞療法の開発の研究も開始する。具体的には以下の通りである。
1. 健常人およびFAP患者よりiPS細胞を樹立：健常人とFAP患者の末梢血リンパ球よりiPS細胞を樹立する（すでに複数の患者より疾患特異的iPS細胞を樹立している）。
2. マクロファージへ分化させ、各抗原の貪食効果を解析：健常人由来とFAP患者由来のiPS細胞からマクロファージへ分化させる。双方のiPS-MΦに（A）で得られた標的抗原を投与し、貪食能や反応性（サイトカイン産生）などに違いがあるか検証する。
3. モデル動物での効果検討：健常人由来とFAP患者由来のiPS-MΦを（A）で得られた標的抗原と共にインキュベーションした後にモデルラットへ投与し、TTR沈着量の変化などを検証する。
4. 副作用の確認：iPS-MΦの投与に伴う、副作用（生体での炎症反応）の確認をラットやウサギを用いて実施する。
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Research Products
(39 results)
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[Journal Article] Labial salivary gland biopsy for diagnosing immunoglobulin light chain amyloidosis: a retrospective analysis.2016
Author(s)
Suzuki T, Kusumoto S, Yamashita T, Masuda A, Kinoshita S, Yoshida T, Takami-Mori F, Takino H, Ito A, Ri M, Ishida T, Komatsu H, Ueda M, Ando Y, Inagaki H, Iida S
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Journal Title
Ann Hematol
Volume: 95
Pages: 279-285
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Phase 1 study of bortezomib in combination with melphalan and dexamethasone in Japanese patients with relapsed AL amyloidosis.2016
Author(s)
Shimazaki C, Fuchida S, Suzuki K, Ishida T, Imai H, Sawamura M, Takamatsu H, Abe M, Miyamoto T, Hata H, Yamada M, Ando Y
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Journal Title
Int J Hematol
Volume: 103
Pages: 79-85
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Effects of tafamidis treatment on Transthyretin (TTR) Stabilization, efficacy, and safety in Japanese patients with familial amyloid polyneuropathy (TTR-FAP) with Val30Met and non-Varl30Met: A phase III, open-label study.2016
Author(s)
Ando Y., Sekijima Y., Obayashi K., Yamashita T., Ueda M., Misumi Y., Morita H., Machii K., Ohta M., Takata A., Ikeda S.
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Journal Title
J Neurol Sci
Volume: 15(362)
Pages: 266-271
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Long-term outcome of patients with hereditary transthyretin V30M amyloidosis with polyneuropathy after liver transplantation.2016
Author(s)
Okumura K., Yamashita T., Masuda T., Misumi Y., Ueda A., Ueda M., Obayashi K., Jono H., Yamashita S., Inomata Y., Ando Y.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 23(1)
Pages: 39-45
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Knee osteoarthritis associated with different kinds of amyloid deposits and the impact of aging on type of amyloid.2016
Author(s)
Yanagisawa A., Ueda M., Sueyoshi T., Nakamura E., Tasaki M., Suenaga G., Motokawa H., Toyoshima R., Kinoshita Y., Misumi Y., Yamashita T., Sakaguchi M., Westermark P., Mizuta H., Ando Y.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 23(1)
Pages: 26-32
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Two brothers homozygous for the TTR V30M both presenting with a phenotype dominated by central nervous complications.2015
Author(s)
Uchida Y., Takada K., Tsugu Y., Ueda M., Yamashita Ｔ., Ando Y., Kobayashi S., Koike H.,, Watanabe T., Matsumoto T., Toyoda T., Yamada G., Matsukawa N.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 22(4)
Pages: 261-262
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Liver Transplantation for Hereditary Transthyretin Amyloidosis: After 20 Years Still the Best Therapeutic Alternative?2015
Author(s)
Ericzon BG., Wilczek HE., Larsson M., Wijayatunga P., Stangou A., Pena JR., Furtado E., Barroso E., Daniel J., Samuel D., Adam R., Karam V., Poterucha J., Lewis D., Ferraz-Neto BH., Cruz MW., Munar-Ques M., Fabregat J., Ikeda S., Ando Y., Heaton N., Otto G., Suhr O.
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Journal Title
Transplantation
Volume: 99(9)
Pages: 1847-1854
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Rapid detection of wild-type and mutated transthyretins2015
Author(s)
Tasaki M., Ueda M., Obayashi K., Motokawa H., Kinoshita Y., Suenaga G., Yanagisawa A., Toyoshima R., Misumi Y., Masuda T., Yamashita T., Ando Y.
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Journal Title
Ann Clin Biochem
Volume: ?
Pages: ?
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Acquired systemic transthyretin amyloid deposits in a case with domino liver transplantation: an autopsy study.2015
Author(s)
Guannan Huang, Mitsuharu Ueda, Masayoshi Tasaki, Yohei Misumi, Teruaki Masuda, Yasuteru Inoue, Genki Suenaga, Hiroaki Motokawa, Risa Toyoshima, Yumiko Kinoshita, Konen Obayashi, Taro Yamashita, Yukio Ando
Organizer
第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
Place of Presentation
東京
Year and Date
2015-08-21 – 2015-08-21
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