2018 Fiscal Year Annual Research Report
Comprehensive analysis of the calcium channels and its relating mechanisms of the inner ear
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15H04990
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
稲垣 彰 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 准教授 (70405166)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鵜川 眞也 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (20326135)
蒲谷 嘉代子 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 助教 (50569259)
富永 真琴 大学共同利用機関法人自然科学研究機構(新分野創成センター、アストロバイオロジーセンター、生命創成探究, 生命創成探究センター, 教授 (90260041)
村上 信五 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (80157750)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 内耳 / 蝸牛 / 聴覚 / 薬理学 / カルシウム感知受容体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までに内耳の新たなカルシウム制御機構としてカルシウム感知受容体（Calcium sensing receptor; CaSR）を同定し、その蝸牛内分布を明らかにしてきた。また、in vivo 薬理学評価系を確立し、薬理学的に機能解析を行った。加えて、分子機能の詳細な解析が可能となるよう、ノックアウトマウスの作製を開始した。
CaSRのノックアウトマウスは致死のため評価困難であり、既報告のとおり副甲状腺ホルモン（PTH）とのダブルノックアウトマウスとし、カルシウム代謝異常を代走することとした。ダブルノックアウトマウスをCRISPR技術を用いて作成を試みたが、難航している。
一方、確率した薬理学的評価系については、蝸牛の正円窓から1～2μリットルの薬剤溶解液をゆっくりと内部に注入する手法を用いて、音響外傷をさけ、DMSOを用いたコントロールでは聴力に影響を生じない評価法を確立し、分子の機能評価を行ってきた。一方、この手法では内部の還流を行わないため、内部への薬剤浸透は単純拡散に依存することとなる。リンパ管は長細い臓器であり、正円窓はその一方にある。加えて、細長い臓器の入り口から先端に向かって、高音から低音を担当しており、入り口、正円窓側の高音部を担当するリンパ液には薬剤濃度が高く、先端では低いという現象が生じる可能性が否定できなかった。このため、微量リンパ液からの薬剤濃度検出技術の確立を行い、確率したin vivo評価系が妥当性をもつかどうか、確認を行い、ノックアウトマウスの作製にさらなる困難が生じた場合にも研究が促進されるよう、より確度の高い代替評価法の確立を目指した。予備実験として液体クロマトグラフィー質量分析法（LS/MS/MS)を用いて、リンパ液の微量薬剤の濃度測定を行い、サブナノモーラーの単位まで良好な測定結果を得ている。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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