2015 Fiscal Year Annual Research Report
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15H05643
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| Research Institution | Kwansei Gakuin University |
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Principal Investigator |
沖米田 司 関西学院大学, 理工学部, 准教授 (90398248)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 嚢胞性線維症 / CFTR / ユビキチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. ΔF508 CFTRとの相互作用に必要なエンドソーム局在ユビキチンリガーゼ機能領域をpulldown 法で解析した結果，アミノ末端領域が相互作用に必要であることが明らかとなった．また，ΔF508 CFTR 発現量に対するエンドソーム局在ユビキチンリガーゼ変異体の影響解析の結果，アミノ末端領域以外に，ユビキチン化に関わるRINGドメインもΔF508 CFTR 発現制御に必要であることが明らかとなった．さらに，我々が同定した新規ユビキチンリガーゼ２種に関しても，上記と同様の実験により，相互作用領域と機能領域を明らかにした．
2. 蛍光タンパク質 Venus の一部を融合することにより，ΔF508 CFTRとエンドソーム局在ユビキチンリガーゼの細胞内相互作用を簡便に評価するBiFC法を確立した．同様に，細胞内におけるユビキチンリガーゼと CFTR NBD1 領域との相互作用を評価するBiFC法を確立した．In vitro 相互作用解析を行うために，高純度のユビキチンリガーゼを精製する手法を確立し，エンドソーム局在ユビキチンリガーゼによる CFTR in vitro ユビキチン化の再構成実験に成功した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
相互作用領域が同定され，また，精製タンパク質の準備が整い，in vitro での相互作用解析を実施可能な状況となったため．
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| Strategy for Future Research Activity |
in vitro 相互作用解析を用いたユビキチン化阻害薬探索を進めていくと共に，in silico で予測されたCFTR結合薬物候補に関してもスクリーニングを行う．
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Research Products
(4 results)
