2015 Fiscal Year Annual Research Report
靭帯骨化発生・進展の分子基盤の解明と治療法の研究開発
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15H05681
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
猪瀬 弘之 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (30615711)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 骨代謝 / 異所性骨化 / 軟骨代謝 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.患者由来靭帯細胞におけるCdk1の発現調節による骨化に対する影響についての検討
術中に採取した後縦靱帯より細胞を培養し、Cdk1を過剰発現及びノックダウンした培養細胞に対してBMP2を用いて骨化誘導を行い、Cdk1の発現調節による骨化への影響について検討した。本検討については現在もサンプル数を増やして継続中である。
2.軟骨代謝におけるCdk1の生理学的意義の検討(in vitro)
予備実験において軟骨特異的Cdk1欠損マウスは著明な低身長を示した。in vitroにて軟骨細胞株であるATDC5細胞を各々用いてCdk1を過剰発現及びノックダウンを行い、軟骨細胞の分化・増殖に対する影響についてCCK8を用いた細胞増殖アッセイや定量的RT-PCRにて詳細に解析し、Cdk1が軟骨増殖において必須であり、Cdk1を欠損することにより軟骨の分化が進行することを明らかにした。更に、器官培養により、cdk1が軟骨増殖・分化の重要な調節因子であるPTHRPの作用において必須であることを明らかにした。
3. 軟骨代謝におけるCdk1の生理学的意義の検討(in vivo)
Cdk1欠損マウスは胎生致死であるため、軟骨細胞特異的Cdk1欠損マウスを作成し、解析した。骨細胞特異的Cdk1欠損マウスは出生後早期に死亡する為、胎児の段階における切片を作成して組織学的検討を行った。Cdk1欠損マウスの四肢は短縮しており、特に増殖軟骨細胞層が欠損していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度の成果により軟骨代謝における細胞周期制御因子の役割についてすでに論文発表を行った。また、骨芽細胞特異的Cdk1欠損マウスについても解析に必要な数のマウスを得ることができており、骨代謝におけるCdk1の意義について解析を開始している。そして、臨床検体を使用した異所性骨化におけるその意義についてもさらに検体数を増加させていく予定である。
以上のように計画は順調に推移している。
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| Strategy for Future Research Activity |
計画は順調に推移している。当初の計画に則り、このまま本研究課題を継続していく。
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