2016 Fiscal Year Annual Research Report
relation with between priodontal bacteria and aneurythms
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15H06050
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
玉原 亨 東北大学, 大学病院, 助教 (40756235)
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Project Period (FY) |
2015-08-28 – 2017-03-31
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Keywords | 口腔内細菌 / 歯周病 / 動脈瘤 |
Outline of Annual Research Achievements |
歯周病が大動脈瘤の発生および病態の進行に深く関わっていることが強く示唆されている。歯周病菌による直接的な大動脈瘤壁への感染とそれに引き続く炎症がその本質であると考えられているが、これまでの報告は大動脈瘤壁に歯周病菌が存在していることをPCR法や免疫染色法にて確認しているのみであった。この方法では血行性に動脈瘤に流れ着いた歯周病菌の残骸を検出している可能性が否定できてない。そこで我々は心臓血管外科との共同研究により、大動脈瘤手術時に摘出した標本から大動脈瘤壁に歯周病菌が存在することの確認に加え、嫌気培養を施行しその歯周病菌が「生きた」状態で存在することを証明することを目的とした。
サンプル採取については心臓血管外科により摘出された動脈瘤壁およびコントロール壁を清潔な状態でそれぞれ-80℃に凍結保存していただき、結果として5例のサンプルを提供していただきた。そのうち1例については動脈瘤壁のみでありコントロール壁はなかった。続いて、得られたサンプルをビーズ破砕した後にDNAを抽出した。まずサンプル中の細菌のDNAの有無を確かめるために、得られたDNA溶液をPCR法を用いて16rRNAをエンコードする領域のDNA増幅を試みた。結果として、得られたDNA溶液は細菌のDNAだけではなく動脈瘤壁のDNAも混ざっているため、これまで報告されている条件でのRCR法ではバックグラウンドが高く、増幅サイクルについても35回以上を要することから、コンタミネーションの可能性を否定できなかった。そこで、アニーリング温度を検討し、55.7℃に設定すると増幅サイクル30回において単一のバンドが検出された。さらに、動脈瘤に付着する血液中の細菌のDNAを除去するためには、培養前の動脈瘤サンプルを次亜塩素酸にて洗浄することで、生きたグラム陽性および陰性菌を動脈瘤壁から完全に除去できることを明らかにした。
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Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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