オートファジーを介したWNKシグナル制御による新規血管トーヌス調節機構の解明

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15H06183
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 銭谷 慕子 (三澤) 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (10760283)
• Project Period (FY): 2015-08-28 – 2017-03-31
• Keywords: 高血圧

Outline of Annual Research Achievements

1. KLHL2ノックアウトマウスの作製；KLHL2をノックアウトする組み換えが起こったES細胞株をC57BL/6マウス胚細胞に注入し、キメラマウスが完成した。現在KLHL2ノックアウトマウスについて、C57BL/6Jマウスとの交配を繰り返し、解析に必要な個体数の確保を目指している。
2. GFP-LC3 transgenicマウスを用いたautophagy誘導条件の検討と血管特異的Atg5ノックアウトマウスの作製；Autophagyを可視化できるLC3-GFP transgenicマウスを用いて、電解質やangiotensinIIの負荷によってautophagyが誘導されるか検索する。Atg5 flox/floxマウスを血管特異的-Creマウスと交配し、Cre-loxPシステムを用いて血管特異的にAtg5をノックアウトしたマウスを作製中である。現在解析に必要な個体数を確保するため、交配をすすめている。
3. 細胞およびC57BL/6マウスでの実験による、angiotensinII以外の血管収縮物質における同機序の関与の検討；血管平滑筋細胞にangiotensinII以外の種々の血管収縮物質を投与し、western blotting法や定量PCRにて細胞や血管組織のKLHL2-WNK3-SPAK-NKCC1カスケードの変化およびマウスの血圧・血管トーヌスの変化を調べ、現在も検討中である。
4. SQSTM1/p62のKLHL2の分解における特異性の検討；SQSTM1/p62とKLHL2や他のKLHL蛋白との結合を免疫沈降法と質量分析を行い、現在もSQSTM1/p62結合蛋白の探索を施行中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

KLHL2ノックアウトマウスの作製、血管特異的Atg5ノックアウトマウスの作製を行っている。現在は交配をして個体数の確保に努めている。
その他の細胞・動物実験についても、進捗はおおむね順調である。

Strategy for Future Research Activity

KLHL2ノックアウトマウスや血管特異的Atg5ノックアウトマウスが、解析可能な十分な個体数が得られ次第、そのフェノタイプを解析する。また塩分・血管収縮物質の負荷によるフェノタイプの変化や、WNKシグナルの変化などを確認する予定である。