2017 Fiscal Year Annual Research Report
Target identification and mechanism of action of neoechinulin A
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15K01808
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| Research Institution | Azabu University |
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Principal Investigator |
紙透 伸治 麻布大学, 獣医学部, 講師 (30553846)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 標的タンパク質 / 生理活性物質 / 活性窒素 / 神経細胞死 / 神経保護効果 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ネオエキヌリンAはパーオキシナイトライト（ONOO-）による神経細胞死を抑制する。本研究は、ネオエキヌリンAの神経保護機構を解明することを目的とした。これまでにファージディスプレイ法を基盤とする手法により、ネオエキヌリンAが直接作用する標的タンパク質として、chromogranin B（secretogranin-1）とglutaredoxin-3を得ている。昨年度は水晶発振子マイクロバランス（QCM）法を用いて、これらのタンパク質とネオエキヌリンAの結合を確認している。本年度はプルダウン法によりネオエキヌリンAとタンパク質の相互作用を解析した。ビオチン化ネオエキヌリンAをストレプトアビジンビーズに固定化し、chromogranin Bとの結合を解析した。その結果、ネオエキヌリンAとchromogranin Bの結合が確認された。
また、昨年度から細胞のchromogranin Bとglutaredoxin-3をノックダウンし、ONOO-に対する感受性がどのように変化するか調べている。siRNAを用いてPC12細胞のchromogranin Bとglutaredoxin-3をノックダウンし、神経成長因子によって神経細胞へと分化させ、SIN-1（ONOO-ドナー）に対する感受性とネオエキヌリンAの保護効果を調べた。その結果、chromogranin BのノックダウンによりSIN-1に対する感受性が下がり、glutaredoxin-3のノックダウンではSIN-1に対して感受性が上がることが示唆された。また、chromogranin Bとglutaredoxin-3のノックダウンは、ネオエキヌリンAの保護作用に影響を与えなかった。以上の結果から、ネオエキヌリンAはchromogranin Bに結合し、その機能を阻害することでONOO-に対する感受性を下げていることが示唆された。
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