2016 Fiscal Year Research-status Report
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15K05571
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| Research Institution | Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences |
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Principal Investigator |
宮崎 達雄 新潟薬科大学, 応用生命科学部, 准教授 (70410222)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
飛澤 悠葵 弘前大学, 医学研究科, 助教 (70623768)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | カルバ糖鎖 / コア２糖鎖 / モノクローナル抗体 / 癌悪性度診断マーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、糖タンパク質に分岐型コア２糖鎖構造を形成する糖転移酵素C2GnTの発現量の増加が、いくつかの癌において悪性度と相関することが示唆されている。また、この酵素C2GnTは尿中のムチン型タンパク質MUC1に分岐型コア２糖鎖を付加する機能をもつ。
本研究課題では、このような知見を利用した新規な癌悪性度診断法の確立を目指して、（１）生体内における安定性に優れた擬似糖であるカルバ糖を非還元末端に有するコア２糖鎖を抗原とした抗コア２糖鎖モノクローナル抗体の作成、（２）その抗体により患者尿検体中のコア２糖鎖を定量する手法の確立、以上２点を検討課題として挙げている。
課題（１）に関連して、平成28年度は分岐型コア２糖鎖（三糖）の部分構造に相当する２種類のカルバ二糖をターゲットとして、両二糖の共通ブロックとなるアミノエチル基を有するD-GalNAc誘導体の合成を検討した。ガラクトサミン塩酸塩を原料とし、常法に従い６工程（２位アミノ基へのTroc基の導入反応、アセチル化、β-選択的チオフェニル化、脱アセチル化、DTBS化、ベンゾイル化）にてガラクトサミン供与体を合成した。次いで、CBz基で保護したアミノエタノールとα-選択的グリコシル化反応を検討した。その結果、ほぼ定量的に目的物を得ることができた。その後、得られた生成物のDTBS基を脱保護し、ベンジリデン化、脱Bz化を実施した。現在、その３位置換基の立体反転反応を検討しているところである。
一方、カルバ糖部分の合成については、平成27年度に確立したカルバ-β-D-ガラクトースを原料に２工程（ベンジリデン化、イソプロピリデン化）で、カルバ-β-D-ガラクトース受容体の合成を達成した。また、低収率が問題点として挙げられているN-アセチル-カルバ-β-D-グルコサミン誘導体については、新たな合成ルートを立案し合成検討を試みている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
２種類のカルバ糖誘導体（カルバガラクトース受容体、N-アセチル-カルバグルコサミン受容体）の合成が予想以上に困難であったため、進捗が遅れている。しかしながら、種々検討した結果、必要な３種類の糖ブロックの合成がほぼ完了した状況にある。今後は、カップリング反応を進める予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
H29年度は、これまでに合成が完了したカルバ糖誘導体とGalNAc誘導体を用いてカップリング反応を検討する予定である。その後、得られたカルバ糖鎖をキャリアタンパク質であるKLHを導入し、モノクローナル抗体の作成に着手する。これらの実験により、カルバ糖を含む擬似糖鎖がヒト型糖鎖の抗体作製のこう減灯して利用可能か否かを明らかとする。
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| Causes of Carryover |
本申請書では、H27、H28年度にマイクロリアクターを用いたカップリング反応を検討する予定であった。しかしながら、カルバ糖合成に時間がかかり、その実施ができなかった。このような理由よりマイクロリアクタ購入分相当が繰越金となっている。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度でマイクロリアクタを購入する予定であるため、研究計画に変更はありません。
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