2017 Fiscal Year Annual Research Report
Innovative nucleic acid medicine targeted for prevention and treatment of malignant transformation of breast cancer
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15K06885
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| Research Institution | Ritsumeikan University |
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Principal Investigator |
吉田 徳之 立命館大学, 薬学部, 助教 (10363996)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 富紀 立命館大学, 薬学部, 教授 (40186325)
杉江 知治 関西医科大学, 医学部, 教授 (70335264)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 非コード性RNA / 乳癌 / 核酸医薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度報告書では、EphA2 アンチセンスRNA（AS）過剰発現及びEphA2 ASと結合してその機能を抑制するセンスデオキシヌクレオチド（seODN）導入は、EphA2 mRNA発現に対して影響がないと報告した。しかしながらその後、核酸細胞内導入試薬を高効率、低毒性のものに変更して改善したところ、EphA2 AS過剰発現によって同mRNAの発現量が増大した。更にLNA化することで安定化させたseODNを用いてEphA2 AS 抑制を検証したところ、特定のseODNを用いた時にのみ、EphA2 AS及び同mRNAの発現を減少させた。更に、この特定のseODN領域に関して、変異型EphA2 ASを作製して過剰発現させたところ、同mRNAに対する発現減少は見られなくなった。これらの結果から、EphA2 ASと同mRNAとは発現に関して正の相関関係があることを示唆したのみならず、EphA2 ASの同mRNAに対する限定された作用部位を同定することができた。
AHCC（活性化糖類関連化合物）はEphA2 AS及び同mRNAの発現を減少させ、細胞増殖を抑制した。ゲノムワイドなトランスクリプトーム解析により、EphA2 mRNAはNFkappaBを介して細胞増殖に、Rac1を介して細胞遊走に関与していることが推測された。これらの結果から、細胞増殖に加えて細胞遊走におけるEphA2 AS の生理的機能を検証するために、seODNまたはAHCCでヒトEphA2 ASを抑制すると、細胞遊走が抑制された。更にレポーターアッセイにより、seODNまたはAHCCでEphA2 ASを抑制するとNFkappaB転写活性が抑制された。
以上の結果より、EphA2 ASは同mRNAに直接的に作用して安定化させ、最終的にNFkappaBを介して細胞増殖に、Rac1を介して細胞遊走に関与することが示唆された。
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