2016 Fiscal Year Research-status Report
遺伝子砂漠に近接した神経関連遺伝子の発現制御に関わる機能性RNA分子群の同定
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15K06898
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
佐野 訓明 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (00294405)
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| Project Period (FY) |
2015-10-21 – 2018-03-31
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| Keywords | DNAトポイソメラーゼ / 核小体移行シグナル / 機能性RNA分子 / DNA弛緩活性 / 神経関連遺伝子 / 遺伝子砂漠 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
DNAトポイソメラーゼIIβ（トポIIβ）は、神経細胞の最終分化過程に於いて一群の神経関連遺伝子の発現誘導に必須な核内因子である。トポIIβによって発現が誘導される遺伝子には、数百kbを超える長大な遺伝子が有意に多く含まれている。また、これらの遺伝子は、ジャンクDNAで占められている遺伝子砂漠に隣接する傾向がある。我々は、このような領域に存在する遺伝子の発現誘導にはトポIIβが必要な場合が多いことを明らかにした。
本研究課題では、トポIIβによる遺伝子砂漠近傍の長大な遺伝子の発現誘導を制御している複数の機能性RNA分子の同定を進めるとともに、これらの制御機構の分子メカニズムの解明を目指している。
昨年度に引き続き、トポIIβのDNA弛緩活性を抑制して核小体への偏在化に関わるCRD（C末端制御ドメイン）の機能解析を行ってきた。CRDに存在するのリジン残基１３個とアルギニン残基３個を４つの領域に区分して、それぞれをアラニン残基に置換した変異型トポIIβ-EGFP融合タンパク質の細胞内局在を蛍光顕微鏡で観察した。CRDの両端にあるリジン残基をそれぞれ置換すると核小体移行が部分的に阻害されることが明らかになった。さらに、これらの複数の置換を組み合わせることで、核小体移行を完全に阻害する変異体の構築を試みている。また、CRDに存在するプロリン指向性セリン/スレオニンキナーゼの認識配列の変異体は核小体局在には影響しなかった。現在までに、CRDに特異的に結合する機能性RNA分子の同定には至っていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
CRDに結合する機能性RNAの同定を行う予定であるが、CRDに特異的に結合するRNA分子の同定には至っていないので、“遅れている”と判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
遅れているCRDに結合する機能性RNA分子の同定を実施していく際に、野生型CRDに結合するRNA分子を精製するだけではなく、核小体局在に影響がでたリジン置換変異型CRDをネガティブコントロールとして用いて、特異的に結合する分子のみを選別する。
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| Causes of Carryover |
計画していたRNAの同定が成功していない為に，研究の実施が想定より遅れている。そのために、RNAの同定以降に使用する予定であった消耗品費の多くが未使用のままである為。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度中にRNAの精製を完了して、ペプチド合成や受託シークエンシングなど予定している消耗品を使用する。
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