2017 Fiscal Year Annual Research Report
The roles of the G-quadruplex-binding activity of human ORC in replication origin establishment
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15K06956
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| Research Institution | Japan Women's University |
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Principal Investigator |
和賀 祥 日本女子大学, 理学部, 教授 (60222402)
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2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | DNA複製 / ORC |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでに引き続き、どのような仕組みによって高等真核生物の複製開始点が染色体DNA上の特定の領域に規定されるのかを明らかにすることを目標に、複製開始点に結合するタンパク質であるORCの解析を進めた。特にG-rich RNA/１本鎖DNA（ssDNA）結合活性を有するORC1サブユニットに着目して研究を進めた。
ヒトや分裂酵母のORCにDNA超らせん誘導活性のあることがすでに報告されている。そして、我々の解析からヒトORC1がその活性を有することが明らかとなっている（未発表データ）。そこで、ORC1のどの領域がその活性を担うかを調べたところ、AAA+ドメインは含まないN末端側領域がDNA超らせん誘導活性を持つことが判明した。この結果は、ORC1のN末端側領域が直接DNAに結合し、さらにDNAに対し何らかの作用を及ぼしている可能性を強く示唆する。
また、G-rich RNA/ssDNA結合活性を有するN末端側領域を除いたORC1(477-861)を含む6量体ORCをバキュロウイルス昆虫細胞発現系によって調製し、この変異ORC６量体においてG-rich RNA/ssDNA結合活性が消失したかどうかをゲルシフト法によって調べた。その結果、予想外にも、ORC1のN末端側領域を欠除したにも関わらず、変異ORC６量体にはG-rich RNA/ssDNA結合活性が残存することが判明した。しかし、変異ORC６量体のもつ活性は、野生型ORCよりは明らかに低く、さらにゲルシフト法での結果において、野性型には見られないバンドシフトが検出された。以上の結果は、ORC1のN末端側領域以外にも、G-rich RNA/ssDNA結合活性を担うドメインが存在することを示す。この新規ドメインを同定するため、今後も継続的な解析が必要であると考えている。
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