2015 Fiscal Year Research-status Report
癌細胞のＯ-グリカン修飾変化によるCTL腫瘍免疫逃避機構の解明
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15K06989
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| Research Institution | Hirosaki University |
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Principal Investigator |
坪井 滋 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (20526727)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大山 力 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80282135)
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| Project Period (FY) |
2015-10-21 – 2018-03-31
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| Keywords | 腫瘍免疫 / 細胞傷害性Tリンパ球(CTL) / 膀胱癌 / リンパ節転移 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）Ｏ-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子の細胞表面表出量の比較
C2GnT高発現膀胱癌細胞YTSにHLA-A24（日本人に最も多いタイプ）のcDNAを導入し、HLA-A24安定発現細胞株YTS（A24YTS）、および、C2GnT発現をノックダウンした細胞A24C2KDを作製した。両細胞のHLA-A24の細胞表面表出量を、抗HLA-A24を用いた生細胞の染色とFACS解析によって比較した結果、A24C2KDの方がHLA-A24細胞表面表出量が低いことがわかった。さらに、生細胞をビオチンでラベルしたのちにアビジン・アガロースを用いた免疫沈降を行い、細胞表面に表出したHLA-A24の量をウェスタン・ブロッティングにより比較した結果もA24C2KDの方が低いことがわかった。
（２）Ｏ-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子の細胞内輸送過程の解析
A24YTSとA24C2KDで、HLA-A24分子の細胞表面への表出速度を阻害剤ブレフェルディンA(BFA)を用いて解析した結果、差がないことがわかった。次に、HLA-A24分子のエンドサイトーシス速度を阻害剤Pitstop 2-200を用いて解析した結果、A24C2KDの方がHLA-A24のエンドサイトーシス速度が高いことがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画に記載された平成２７年度計画の実験２つを行い、それぞれ、結果を得ることができた。これは、全期間に計画した実験５つのうち２つを完遂することができたこと意味する。このため、おおむね順調に進展していると評価できる。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画に記載された平成２８年度以降の実験（３）～（５）のうち、（３）Ｏ-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子と抗原ペプチドとの親和性比較。および、（４）C2GnT発現抑制膀胱癌細胞によるCTL腫瘍免疫抵抗性のin vivoにおける検討。の２つの実験を行い、Ｏ-グリカン修飾変化によるCTL腫瘍免疫逃避機構解明に迫りたい。
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| Causes of Carryover |
交付内定が９月と、通常よりも６か月遅かった。このため、初年度の研究期間が短くなり、その分の使用を翌年度に繰り越さざるを得ない状況になった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究計画で初年度購入予定とした機器（顕微鏡用デジタルカメラ）を購入し、遂行予定であった実験に使用することを計画している。さらに、次年度に繰り越した資金を使って、初年度に行えなかった、リンパ節標本を用いたC2GnT、および、HLA-Iの発現解析を行うことを計画している。
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