2016 Fiscal Year Research-status Report
卵母細胞分化を阻害し、卵巣形成過程での細胞間情報伝達を探る
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15K07127
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
金森 章 名古屋大学, 理学研究科, 講師 (40324389)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木下 政人 京都大学, 農学研究科, 助教 (60263125)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 生殖細胞 / 性分化 / 卵形成 / 転写因子 / CRISPR/Cas9 / pachytene check point |
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| Outline of Annual Research Achievements |
脊椎動物の生殖巣性分化は体細胞（上皮細胞）での性決定遺伝子の発現により開始されるが、特定の細胞種のみの性転換はほとんど見つからない。このように全体に協調して進行する性分化過程では、細胞間での性特異的な情報伝達が不可欠と考えられるが、それをになう分子・細胞機構の詳細はまったく不明のままである。そこで本研究では、1) 生殖細胞で発現する卵形成のイニシエーター転写因子 figα の 機能欠損変異メダカを、新規ゲノム改変技術、CRISPR/Cas システムにより作出し、２) 卵巣分化過程の表現型を生殖細胞、体細胞それぞれの形態及び遺伝子発現の両方から詳細に解析し、卵巣形成過程での細胞間情報伝達を知ることを目的とする。
前年度にはCRISPR/Cas9により3系統のnull変異体を得た。雄では顕著な表現型は無いが、雌では卵形成がdiploteneの前、pachyteneで停止していた。この表現型は卵母細胞に備わるpachytene check pointが働いた時のものに酷似していた。そこでさらに変異体の表現型を減数分裂時のシナプトネマ構造体のSYCP1及びSYCP３抗体、DNAの二重鎖切断を認識するγ-H2AX抗体により染色し、停止した卵母細胞の状態を詳細に調べた。その結果パキテンチェックポイントを起動させうるダブルストランドブレイクの未修復や、対合の異常などは確認されなかった。よって、この表現型はパキテンチェックポイントとは異なる、未知の経路により引き起こされていることが示唆された。くわえて停止した卵母細胞の多くはアポトーシスには入らないことがTUNEL法によりあきらかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
変異体の表現型解析は順調にすすんでおり、この年度でおおかたの結果が得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は転写因子 figα の 機能欠損により下流遺伝子や体細胞、生殖細胞の性分化マーカーの発現に対する影響を調べる予定である。
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| Causes of Carryover |
転写因子 figα の 機能欠損により下流遺伝子や体細胞、生殖細胞の性分化マーカーの発現に対する影響を調べる予定だったが、この部分を2017年度に行なうことになったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
これまでの結果と前述のマーカー遺伝子群の発現を年度中に終わらせ、論文投稿の予定である。
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[Journal Article] Diversity, distribution, and significance of transposable elements in the genome of the only selfing hermaphroditic vertebrate Kryptolebias marmoratus.2017
Author(s)
Rhee JS, Choi BS, Kim J, Kim BM, Lee YM, Kim IC, Kanamori A, Choi IY, Schartl M, Lee JS
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 7
Pages: 40121
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Presentation] The Genomes of the only self-fertilizing vertebrate2016
Author(s)
Akira Kanamori, Jaebum Kim, Jae-Seong Lee, John H. Postlethwait, Yoshitaka Yoshitaka
Organizer
The 22nd International Congress of Zoology and The 87th meeting of Zoological Society of Japan
Place of Presentation
OIST&OCC 沖縄
Year and Date
2016-11-14 – 2016-11-19
Int'l Joint Research
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