2017 Fiscal Year Annual Research Report
Studies on molecular mechanisms for functional evolution of oviduct to establish internal fertilization
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15K07165
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
渡辺 絵理子 山形大学, 学士課程基盤教育機構, 准教授 (20337405)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
渡邉 明彦 山形大学, 理学部, 教授 (30250913)
越智 陽城 山形大学, 医学部, 准教授 (00505787)
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| Project Period (FY) |
2015-10-21 – 2018-03-31
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| Keywords | 精子運動開始因子 / CRISPER/CAS9 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１、H27、28年度にCRISPER/CAS9システムにより作成した、Sperm Motility-Initiating Substance（SMIS）のシステインノットドメイン構造に必須の6システイン残基のうちの1つを欠損させたSMIS遺伝子改変アカハライモリの輸卵管及び子宮分泌物を用いてウェスタンブロッティング解析を行った。野生型メスではSMISに対する2種類の抗体により、異なる重合状態及びコンフォメーションを反映すると考えられる複数のバンドを検出したが、SMIS遺伝子改変アカハライモリでは、22kDaの分子が検出されない個体を見出した。22kDa分子は精子に結合する可能性が示唆され、その精子運動開始活性について今後さらに検討する。
２、体外受精を行う有尾両生類トウホクサンショウウオ輸卵管のRNAseqの結果を解析し、アカハライモリSMISに高い相同性を持つコンティグ配列を得た。アカハライモリSMISでは6システイン残基により形成されるシステインノットドメイン構造中に７アミノ酸残基からなる活性部位が存在するが、トウホクサンショウウオのコンティグ配列から推定されたアミノ酸配列には活性部位のアミノ酸配列と、システインノットドメイン構造に関与するシステイン残基が保存されており、体外受精種のSMIS遺伝子が初めて同定された。一方、H27年度から異なる4条件下のモリアオガエル輸卵管から抽出したRNAを用いて行ってきたRNAseqについて、その結果を解析したが、SMIS遺伝子を検出できなかった。SMISの存在はウェスタンブロッティングにより示唆され、モリアオガエルではSMIS発現の領域とタイミングが極めて限定的であると考えられる。
３、アカハライモリ輸卵管曲部のRNAseqを行い、新規SMISヴァリアントを発見した。今後、生理活性や局在形成への関与について検討する。
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Research Products
(11 results)
