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2016 Fiscal Year Research-status Report

イヌ皮膚線維芽細胞におけるセラミド代謝物による炎症制御

Research Project

Project/Area Number 15K07728
Research InstitutionNihon University

Principal Investigator

杉谷 博士  日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20050114)

Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords線維芽細胞 / 炎症 / TNF-α / プロスタグランジンE2 / シクロオキシゲナーゼ2 / MAPキナーゼ
Outline of Annual Research Achievements

創傷治癒は,受傷の直後に生じる出血と凝固止血に始まり,その後の炎症反応による壊死組織・細菌等の除去,に公家組織の形成,再上皮化,マトリクス形成と続き,組織修復の終了後は,それ以上の炎症反応や細胞増殖を抑制して定常状態に戻るという複雑な生物学的事象である。そのため,炎症メカニズムを明らかにすることは皮膚機能再生に重要なことと考えられる。皮膚の創傷治癒の場合,最終的な組織修復を担うのは線維芽細胞と表皮角化細胞である。そこで,初代培養されたイヌ皮膚由来線維芽細胞を用い,免疫や炎症に関与するサイトカインの一種であり,生体防御において重要な役割を担っている腫瘍壊死因子α(TNF-α)の炎症メカニズムに関与する細胞内シグナル伝達について検討した。イヌ皮膚由来線維芽細胞をTNF-αで刺激すると,時間依存性および濃度依存性に炎症に関わるプロスタグランジンE2(PGE2)の放出が確認された。また,TNF-α刺激された細胞において,PGE2産生に関わるとされるシクロオキシゲナーゼ-2(COX-2)のmRNAおよびタンパク質発現が促進された。MAPキナーゼ系の関与を阻害剤で検討したところ,ERKおよびp38阻害剤によりTNF-αの効果は抑制された。さらに,TNF-α刺激された細胞においては,ERK1/2およびp38のリン酸化が認められ,これもそれぞれの阻害剤で阻害された。一方,サイトカイン刺激で活性化する転写因子と考えられているNuclear factor κB(NF-κB)阻害剤の効果は認められなかった。イヌ皮膚由来線維芽細胞において,他の炎症性サイトカインであるインターロイキン1β(IL-1β)誘導性COX-2発現にはによるERKの活性化が関与することを既に報告したが,TNF-α誘導性のCOX-2発現においては異なる因子が関わることが示唆された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

本研究はイヌ皮膚由来線維芽細胞における炎症制御に対するセラミド代謝物の効果を明らかにすることを目的としているため,初めにイヌ皮膚由来線維芽細胞における炎症性サイトカインを用いた炎症に関わる細胞内シグナルの検討を進めている。別の炎症性サイトカインのであるIL-1β 刺激を行うと,PGE2放出が認められ,PGE2合成に変わるCOX-2 mRNAの発現が上昇するが,この場合のMAPキナーゼはMEK/ERKの活性化が優位に関わっていることを既に報告している。また,このMEK/ERK活性化には,従来,転写因子と考えられていたNF-κB が転写調節を介さずに関わることを明らかにした。しかし,今回の結果は,同様な炎症性サイトカインであるTHF-α刺激された細胞においては,MEK/ ERKの活性化に加えて,p38の活性化が認められたことから,リガンドの差によるMAPキナーゼ経路の活性化は異なることが考えられる。さらに,TNF-α刺激によるNF-κB阻害剤の効果は認められなかったことから,MEK/ERK 経路やp38の上流には異なる活性化因子が関わることが考えられる。以上の結果は,イヌ皮膚由来線維芽細胞における炎症メカニズムは極めて複雑なシグナル構成がなされていることを意味するものであり,この点の解明が必要と思われる。

Strategy for Future Research Activity

近年,我々の研究において,イヌおよびネコの炎症メカニズムを初代培養線維芽細胞を使用して検討する中で,従来考えられていた炎症性サイトカイン誘導性のCOX-2発現とPGE2産生の過程に,MAPキナーゼシグナル内でのクロストークが存在することを明らかにした。すなわち,JNKのサブタイプであるJNK1によるERK1/2活性化調節が明らかとなった。そのため,初代培養イヌ皮膚由来線維芽細胞を用いて,炎症性サイトカインであるIL-1βやTNF-αの作用メカニズムを明らかにするために,IL-1β刺激によるNF-κBとERKの相互作用,また,TNF-α刺激によるERKとp38の相互作用につき阻害剤と特異的抗体を用いた免疫沈降法を用いて検討を行うことでMAPキナーゼ経路内のクロストークについて検討を行う。さらに,MAPキナーゼ系のリン酸化酵素のアイソフォームの役割や,NF-κBのアイソフォームの発現とその役割についても,すでに確立されているsiRNAを用いたノックダウンにより,COX-2やPGE2放出を指標に,機能との関連も含めて検討を行う。その後に,得られたシグナル経路に対する効果も含めて,セラミド代謝物であるスフィンゴシン,スフィンゴシン 1-リン酸,セラミド-リン酸およびセラミドによるMAPキナーゼおよびNF-κBの活性化の関与について検討を進める。以上の結果より,目標としているイヌ皮膚由来線維芽細胞における炎症制御に対するセラミド代謝物の効果を考察する。

  • Research Products

    (16 results)

All 2017 2016

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 3 results) Presentation (13 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results,  Invited: 1 results)

  • [Journal Article] JNK activation is essential for activation of MEK/ERK signaling in IL-1β-induced COX-2 expression in synovial fibroblasts.2017

    • Author(s)
      Kitanaka T, Nakano R, Kitanaka N, Kimura T, Okabayashi K, Narita T, Sugiya H.
    • Journal Title

      Sci Rep.

      Volume: 7 Pages: 39914

    • DOI

      10.1038/srep39914

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Cell biological assays for measuring odontogenic activities of CCN proteins.2017

    • Author(s)
      Muromachi K, Sugiya H, Tani-Ishii N.
    • Journal Title

      Methods Mol Biol.

      Volume: 1489 Pages: 251-260

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Expression and function of interleukin-1β-induced neutrophil gelatinase-associated lipocalin in renal tubular cells.2016

    • Author(s)
      Konno T, Nakano R, Mamiya R, Tsuchiya H, Kitanaka T, Namba S, Kitanaka N, Okabayashi K, Narita T, Sugiya H.
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 11 Pages: e0166707

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0166707

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] NF‐κB regulates MEK/ERK signaling pathway in fibroblasts.2016

    • Author(s)
      Sugiya H, Nkano R, Tsuchiya H
    • Organizer
      4th International Symposium on Salivary glands in Honor of Niels Stensen
    • Place of Presentation
      岡崎カンファレンスセンター(愛知県・岡崎市)
    • Year and Date
      2016-12-02
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Involvement of MARCKS phosphorylation and translocation in amylase release in exocrine gland acinar cells.2016

    • Author(s)
      Satoh K, Sugiya H, Seo Y
    • Organizer
      4th International Symposium on Salivary glands in Honor of Niels Stensen
    • Place of Presentation
      岡崎カンファレンスセンター(愛知県・岡崎市)
    • Year and Date
      2016-12-02
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] PKCε regulates MEK/ERK signaling pathway in fibroblasts.2016

    • Author(s)
      Nakano R, Sugiya H
    • Organizer
      4th International Symposium on Salivary glands in Honor of Niels Stensen
    • Place of Presentation
      岡崎カンファレンスセンター(愛知県・岡崎市)
    • Year and Date
      2016-12-01
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] イヌ滑膜線維芽細胞のTNF-α処理によるIL-8の発現とMAPキナーゼ経路の関与2016

    • Author(s)
      難波信一,中野令,北中卓,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-07
  • [Presentation] ネコ滑膜線維芽細胞におけるIL-1β誘導性の新規ERK活性調節:JNK依存性MEK/ERK経路2016

    • Author(s)
      北中卓,中野令,北中菜菜子,木村太郎,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-07
  • [Presentation] ネコ滑膜線維芽細胞におけるグルコサミンによるIL-1β誘導性COX-2発現の抑制2016

    • Author(s)
      北中菜菜子,中野令,北中卓,木村太郎,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-07
  • [Presentation] 腎臓尿細管細胞におけるIL-1β誘導性NGAL分泌と機能2016

    • Author(s)
      今野忠好,中野令,間宮遼,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-06
  • [Presentation] イヌ皮膚線維芽細胞におけるブラジキニン誘導性COX-2発現:B2受容体/Gq/PLD/PDKによるPKCεを介したERK核移行制御2016

    • Author(s)
      中野令,北中卓,難波信一,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-06
  • [Presentation] イヌ皮膚線維芽細胞におけるTNF-αによるシクロオキシゲナーゼ-2発現:MEK/ERKおよびp38経路の関与2016

    • Author(s)
      吉池卓也,中野令,難波信一,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-06
  • [Presentation] イヌ皮膚線維芽細胞におけるインターロイキン1βによるMEK/ERK, p38シグナリング経路を介したインターロイキン6の発現2016

    • Author(s)
      杉浦叶,中野令,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-06
  • [Presentation] ステロイドはイヌ皮膚線維芽細胞におけるインターロイキン1β刺激によるシクロオキシゲナーゼ-2 mRNA発現を阻害しない2016

    • Author(s)
      最首桃子,中野令,岡林堅,成田貴則,杉谷博士
    • Organizer
      第159回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県・藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-06
  • [Presentation] JNK-1 p54 isoform regulates MEK/RK signaling pathway, which contributes to interleukin-1β-induced cyclooxygenase-2 expression in fibroblasts from synovial membrane.2016

    • Author(s)
      Nakano R, Kitanaka T, Kitanaka N, Namba S, Konno T, Okabayashi K, Narita T, Sugiya H
    • Organizer
      12th International Congress of Cell Biology
    • Place of Presentation
      Prague Congress Centre (Czech Republic)
    • Year and Date
      2016-07-23
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Interleukin-1β-induced expression and function of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in renal tubular cells2016

    • Author(s)
      Konno T, Nakano R, Mamiya R, Tsuchiya H, Okabayashi K, Narita T, Sugiya H
    • Organizer
      12th International Congress of Cell Biology
    • Place of Presentation
      Prague Congress Centre (Czech Republic)
    • Year and Date
      2016-07-23
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2018-01-16  

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