ゲノム編集技術を用いた核膜孔構成因子レポーターマウスの作出とその機能解析

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K07780
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 秋山 耕陽 岡山大学, 自然生命科学研究支援センター, 特任助教 (20515142)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: ゲノム編集 / 発生工学

Outline of Annual Research Achievements

平成28年度では、CRISPR/Cas9システムを利用したノックインマウスを作出方法の確立を目指し、下記の研究を予定した。
1.Tmem48遺伝子の翻訳開始部位および翻訳停止部位を標的としたguide RNAを設計する。CRISPR/cas9システムでは、設計されたguide RNAごとにそのDNA切断効率が大きく異なることから、本実験では、それぞれ4ヶ所程度を標的としたguide RNAを構築する。
2.GFPもしくは3xFLAGがTmem48のN末端側に挿入された融合タンパク質として機能するようにドナーベクターを構築する。
3.作成した guide RNA、Cas9 mRNAおよびドナーベクターをマウスの前核期受精卵にマイクロインジェクションし、1-2細胞期の受精卵を卵管移植したのち自然分娩にて得られた産仔の遺伝子型を解析することで目的とする遺伝子改変マウスを選抜する
しかしながら、本年度は研究環境の整備に時間を要したため、guide RNA、Cas9 mRNAおよびドナーベクターとして利用するTmem48-N+AcGFP1/pUC19とTmem48-N+3xFLAG/pUC19の作成にとどまり、具体的に遺伝子改変マウスの作出にはいたらなかった。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

ゲノム編集による遺伝子組換え動物の作出を目指し、本年度の研究を計画したが、本年度は、研究環境の整備に時間がかかったため、研究を実施することが困難であった。そのため遺伝子改変マウスを作出に必要な動物実験計画の学内承認と本研究計画に必要なguide RNA、Cas9 mRNAおよびドナーベクターとして利用するTmem48-N+AcGFP1/pUC19とTmem48-N+3xFLAG/pUC19の作成にとどまっている。以上のことから本年度の達成度は、(4)遅れている、と自己評価した。

Strategy for Future Research Activity

当初研究計画を遂行するためには次年度以降、早急な対応が必要となるが、必要な技術等はすでに修得しており、組換えDNA実験および動物実験計画書等の学内承認そして試薬等の購入は済ませている点からも具体的に研究を実施することで当初計画を大きく変更することなく研究を遂行することができる。

Causes of Carryover

研究環境の整備に時間がかかったため、研究を実施することが困難であった。そのため、本年度に購入予定であった実験動物や機器類が購入できなかったことから次年度に繰越す研究費が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度に繰越した研究費は、本年度の研究計画で購入予定であった物品の購入に充当させる。