2016 Fiscal Year Research-status Report
光応答性活性酸素発生物質を標識試薬として用いる反応制御型化学発光分析法の開発
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15K07890
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
岸川 直哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (90336181)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 化学発光 / キノン / HPLC / 紫外線照射 / 生体アミン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、活性酸素発生能を有するキノンを標識試薬として用いる、発光反応を制御可能な化学発光分析法の開発を行っている。
本年度は、前年度の検討により標識試薬としての有用性が確認されたアントラキノン-2-カルボニルクロリドを用いるアミンのプレカラム標識 HPLC 化学発光定量法の開発を行った。このとき、生体内に存在する典型的なアミンであるフェネチルアミン及びトリプタミンを測定対象として選択した。フェネチルアミン及びトリプタミンを塩基性条件下でアントラキノン-2-カルボニルクロリドと混合して室温で放置することにより標識反応を行った。反応溶液を逆相カラムを備えた HPLC システムに注入して標識体を分離後、紫外線ランプに巻き付けたテフロンチューブを通過させることによりオンラインで紫外線照射を行った。紫外線照射後の溶液をルミノール溶液と混合してから化学発光検出器へと導入することで、フェネチルアミン及びトリプタミン標識体に由来する化学発光ピークをクロマトグラム上に検出された。これらの化学発光ピークは紫外線ランプをオフにすることにより完全に消失したことから、紫外線照射を行うことではじめて標識体のキノン部から活性酸素が発生し、これがルミノールと反応することで化学発光が生じたと考えられた。したがって、測定対象標識体が紫外線照射部を通過するときのみ紫外線ランプをオンにすることで、標識試薬であるアントラキノン-2-カルボニルクロリドやその分解物の影響を抑えることができると考えられる。
さらに、キノン構造を有する新たな化学発光標識試薬として、1,2-ジアミノアントラキノンと 4-ホルミルフェニルボロン酸とを縮合させた化合物を合成した。本試薬はアリールハライドに対する反応部位としてフェニルボロン酸構造を有していることから、アリールハライド型医薬品の化学発光定量への応用が期待される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画通りに、アントラキノン-2-カルボニルクロリドを標識試薬として用いる生体内在性アミンのオンライン紫外線照射 HPLC 化学発光検出システムを開発できた。本 HPLC システムにおいては紫外線ランプのオン／オフの切替により、化学発光反応が生じるタイミングを任意に制御できることが確認され、本研究で開発する方法の特色である紫外線照射による化学発光反応の制御が可能であるとの有用な知見を得た。また、研究計画に記載の通り、アリールハライドに対する標識試薬として利用可能なフェニルボロン酸型キノン試薬の合成も達成できた。
上記のように本年度の検討において、紫外線照射のオン／オフにより化学発光のオン／オフを制御可能な化学発光分析法を開発するという本研究課題の主要な目的を達成できたと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度の検討により、アントラキノン-2-カルボニルクロリドをプレカラム標識試薬として用いるフェネチルアミン及びトリプタミンのオンライン紫外線照射 HPLC 化学発光検出システムの開発できたことから、今後は化学発光反応条件の最適化を行った後で感度や再現性といった分析性能の評価を行っていく。さらに、開発した方法を血液試料へと応用することにより本法の生体分析法としての実用性の評価を行う予定である、また、本年度に合成を行ったフェニルボロン酸型キノン試薬について、化学発光応答性やアリールハライドとの反応性について検討を行う予定である。
さらに、前年度までに合成を行っていたビオチン化キノンを用いて、引き続きアビジン-ビオチン結合を介する化学発光イムノアッセイの開発を行っていく。
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| Causes of Carryover |
HPLC 等の分析機器について、装置の改善により維持・運用コストの低減が可能であったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
HPLC 分析法やイムノアッセイの開発に必要な器具・試薬の購入へと充当する。
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[Journal Article] Spatial correlativity of atmospheric particulate components simultaneously collected in Japan.2016
Author(s)
Funasaka K, Asakawa D, Oku Y, Kishikawa N, Deguchi Y, Sera N, Seiyama T, Horasaki K, Arashidani K, Toriba A, Hayakawa K, Watanabe M, Kataoka H, Yamaguchi T, Ikemori F, Inaba Y, Tonokura K, Akiyama M, Kokunai O, Coulibaly S, Hasei T, Watanabe T
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Journal Title
Environmental Monitoring and Assessment
Volume: 188(2)
Pages: 85
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] 蛍光反応の臨床化学への応用2016
Author(s)
岸川直哉
Organizer
第34回九州分析化学若手の会夏季セミナー
Place of Presentation
みるきーすぱサンビレッヂ（大分県日田市）
Year and Date
2016-07-29 – 2016-07-29
Invited
