2016 Fiscal Year Research-status Report

リポタンパク質受容体を介したリポソームの細胞内動態の分子メカニズム

Research Project

Project/Area Number	15K07915
Research Institution	National Institute of Health Sciences
Principal Investigator	加藤くみ子国立医薬品食品衛生研究所, 薬品部, 室長 (10398901)
Project Period (FY)	2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords	リポソーム / リポタンパク質
Outline of Annual Research Achievements	昨年度、PEG修飾リポソームのHepG2細胞への取り込みに低比重リポタンパク質（LDL）受容体が関与することが示唆されたことから、LDL受容体の関与について、本年度はより詳細な検討を進めた。LDL受容体の発現をsiRNAにより阻害することにより、コントロール群に比べ、PEG修飾リポソームのHepG2細胞内取り込みが有意に抑制された。この結果より、中和抗体とは異なる特異的手法においても、PEG修飾リポソームのHepG2細胞内取り込みへのLDL受容体の関与について示すことができた。また、培養液中に含有されるFBSを取り除くとPEG修飾リポソームの細胞内取り込みが大きく減弱することが確認され、FBS中の成分がPEG修飾リポソームの細胞内取り込みに関わっていることが示唆された。LDL受容体はアポリポタンパク質を認識することによりLDLを取り込むことが報告されていることから、リポタンパク質を除去した血清を培地に用いると、PEG修飾リポソームの細胞内取り込みは有意に減弱した。しかし、その程度は、FBSを除いた血清を用いた結果に比べて小さかった。以上より、アポリポタンパク質がPEG修飾リポソームのLDL受容体を介した取り込みに関与している可能性が示唆されるとともに、FBS中には、PEG修飾リポソームの取り込みに関与するアポリポタンパク質以外の因子も含まれている可能性が示唆された。次年度は、PEG修飾リポソームのHepG2細胞への取り込みに関与している因子について、さらに詳細な検討を進める予定である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 本研究の目的は、HepG2細胞を用い、PEG修飾リポソームとリポタンパク質受容体との相互作用、及び細胞内取り込みに焦点を当て、PEG修飾リポソームの細胞内取り込みの分子メカニズムをより詳細に解析することである。本年度は、HepG2細胞へのPEG修飾リポソームの取り込みにLDL受容体が関与することを、昨年度と異なる手法で確認することができた。更に、PEG修飾リポソームの細胞への取り込みに関わるアポリポタンパク質等の因子の存在が実験結果より示唆され、おおむね順調に進展している。
Strategy for Future Research Activity	PEG修飾リポソームのHepG2細胞への取り込みにLDL受容体が関与することが示唆されたことから、LDL受容体の関与について、より詳細な検討を進める。また、PEG修飾リポソームのHepG2細胞への取り込みにおける、LDL受容体以外の生体内因子の関与に関して精査する。
Causes of Carryover	平成28年度の研究費を計画通り使用できたが、経理処理手続き上の理由により、来年度使用額が生じた。
Expenditure Plan for Carryover Budget	来年度は、主にリポソーム構成脂質や抗体など試薬の購入費として利用する予定である。