2016 Fiscal Year Research-status Report
哺乳動物細胞の繊毛小胞形成に介在する分子機構の解明
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15K07931
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
小林 哲夫 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教 (80433994)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 一次繊毛 / 繊毛小胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までに、繊毛小胞形成を制御することが知られているRab11-Rabin8-Rab8-Sec15カスケードに介在する分子をプロテオミクス法により探索し、低分子量GTP結合タンパク質であるRab11と相互作用する候補分子として新規低分子量GTP結合タンパク質であるpX2を同定した。また、免疫染色法により網膜色素上皮由来RPE1細胞においてpX2が一次繊毛の根元である中心小体に局在することを見出した。さらに、RPE1細胞を用いたpX2の発現抑制実験により、pX2が一次繊毛形成に必要であること、pX2が一次繊毛形成抑制タンパク質であるCP110の乖離に必要であることが示唆されていた。
今年度は、pX2とRab11の結合様式を詳細に解析した。pX2とRab11は共にGTP結合タンパク質であることから、両者の結合に対するグアニンヌクレオチド依存性を、HEK293T細胞を用いた免疫沈降実験により評価した。その結果、pX2、Rab11共に、特定のグアニンヌクレオチド型において結合能が高まることが示唆された。次に、両者が直接結合するかを調べるために、大腸菌発現系を用いてリコンビナントタンパク質の精製を試みたところ、pX2, Rab11共に純度の高い精製タンパク質が十分量得られた。現在は、これらの精製タンパク質を用いて、pX2とRab11が直接結合するか、またその結合に対するグアニンヌクレオチド依存性について評価している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
繊毛小胞形成への介在が期待される新規タンパク質pX2の機能が解明されつつ有るため。
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| Strategy for Future Research Activity |
pX2による繊毛小胞形成制御機構を明らかにするため、以下の解析を計画している。
１．リコンビナントタンパク質を用いたpX2とRab11の結合様式の解析
２．pX2の発現抑制がRab11の機能、及び繊毛小胞形成に及ぼす影響の検証
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