2016 Fiscal Year Research-status Report

胆汁酸への異化代謝促進による高コレステロール血症の治療および予防対策

Research Project

Project/Area Number	15K08084
Research Institution	Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences
Principal Investigator	大和進新潟薬科大学, 薬学部, 教授 (60057370)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中川沙織新潟薬科大学, 薬学部, 助教 (30410228)
Project Period (FY)	2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords	胆汁酸 / ケノデオキシコール酸 / コール酸 / 7α-ヒドロキシコレステロール / 27-ヒドロキシコレステロール
Outline of Annual Research Achievements	1.　胆汁酸定量法の確立前年度、酵素サイクリング法のTBA測定キットを用いて細胞培養液中の総胆汁酸量を測定したが、検出限界以下であった。今年度、キットの改良を試み、約10倍の感度上昇を得たが、細胞培養液および細胞内の胆汁酸濃度の定量には不十分であった。そのため、より高感度なLC-MS/MS法を用いたコール酸（CA）およびケノデオキシコール酸（CDCA）の同時定量法を確立し、細胞培養液に応用した。 2.　培養条件による胆汁酸産生能の相違に関する検討確立したLC-MS/MS法を用いて、培養条件による胆汁酸産生能の違いを検討したところ、72時間培養において、CDCAがコントロールと比べ、3.3倍と有意な増加を認めた。また、CDCAの前駆体である27-ヒドロキシコレステロールについても同様に、3倍近い増加が認められた。しかしながら、CAおよびその前駆体である7α-ヒドロキシコレステロールについては、大きな変化が認められなかった。 3.　肝細胞を用いた胆汁酸への異化代謝を促進する物質の探索ポリフェノールのエリオジクチオール、ナリゲンニン、ヘスペレチン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、胆汁酸促進薬のプロブコール、生薬由来成分のゲニピン、スウェルチアマリン、胆汁酸促進作用が報告されているアミノ酸の1種であるS-メチルシステインスルホキシド、コレステロールの構造に類似している食品中の成分であるβ-シトステロール、カンペステロール、スティグマステロールの計12種類について検討を行った。この中で、ナリンゲニン、スティグマステロールについては、CDCA減少の可能性が、β-シトステロールについては、CDCAの微増の可能性が推察された。しかしながら、現在用いている肝細胞株がCDCAを産生する経路のみの評価であるため、CAを産生する細胞株を用いた再評価の必要性が認められた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 本研究課題専従の実験補助員を得て、胆汁酸の高感度LC-MS/MS定量法を確立でき、胆汁酸に対する物質の評価も比較的順調に進んでいる。しかしながら、明らかに胆汁酸を促進する物質は、今のところ、見つかっていない。理由として、現在用いている肝細胞株は、代替経路である27-ヒドロキシコレステロールを経て合成されるケノデオキシコール酸の評価には応用できるが、古典経路である7α－ヒドロキシコレステロールを経て合成されるコール酸を評価するには、コール酸の産生量が少な過ぎるためと考えられた。そのため、古典経路の正しい評価には、培養時間や培地の変更、肝細胞株の変更等の更なる改良の必要性を認めるに至った。
Strategy for Future Research Activity	胆汁酸合成の主ルートである7α-ヒドロキシコレステロールを経てコール酸（CA）を産生する古典経路の評価が行える肝細胞株を用いて、機能性因子を再評価する必要がある。入手しやすい肝がん細胞株は、この古典経路が進まない、あるいは進みにくいと報告されているため、正常肝細胞株を入手し、中でもCA産生能が高い正常肝細胞株を用いて、再検討する予定である。また、評価物質も、食品中に含まれるコレステロール類似体や他のポリフェノールなどを追加し、胆汁酸合成を促進する物質をさらに検討していく予定である。また、胆汁酸促進だけではなく、治療においては、コレステロールの減少が必須であるため、コレステロール濃度も当研究室で確立しているGC-MS法を用いて測定し、コレステロール合成系の低下についても、同時に確認する。