2015 Fiscal Year Research-status Report
Project/Area Number |
15K08131
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Research Institution | Shinshu University |
Principal Investigator |
福島 菜奈恵 信州大学, 学術研究院医学系, 准教授 (90334888)
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Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | 神経再生 |
Outline of Annual Research Achievements |
損傷後に再生する神経線維の髄鞘化を促進するために、中枢神経における再生モデルを使用した髄鞘化誘導実験を行った。麻酔下で生後2日のラットの脳内嗅覚伝導路である外側嗅索を手術用顕微鏡下で切断した。切断は左側で行い、眼科用角膜切開メスを用いて鋭利に切断した。外側嗅索が完全に切断されていることを確認するため、逆行性の神経トレーサーであるFast Blue(FB)を切断側の嗅皮質へ0.1~0.2μl注入した。手術後は母ラットの元に戻し生育させた。生後5日目から20日目まで甲状腺ホルモン(L-Thyroxine sodium salt pentahydrate)を200μg/kgで、または、アセチル-L-カルニチン(O-Acetyl-L-carnitine hydrochloride)を100mg/kgで1日1回腹腔内に投与した。コントロール群には薬剤の代わりに生食を投与した。生後30日目に灌流固定し、脳を採取した。嗅球から矢状断で作成した50μm厚の連続凍結切片を蛍光顕微鏡下で観察し、不完全切断例を除外した。不完全切断例では切断直後に注入したFBが残存する神経線維に取り込まれて逆行性に運ばれ、嗅球内にFB陽性の僧帽細胞が観察された。完全切断例では、嗅球内にFB陽性の僧帽細胞は観察されなかった。完全切断例において、外側嗅索および嗅皮質を含む残りの脳から前額断で50μm厚の連続凍結切片を作成し、抗Myelin basic protein (MBP)抗体を用いた免疫染色を行った。MBP染色切片を観察した結果、アセチル-L-カルニチン投与群において髄鞘化が誘導されている可能性が示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
中枢神経再生モデルラットの作成・薬剤投与の実験系を確立することができた。また、薬剤投与によって髄鞘化が誘導されることが示唆されたため、解析を進めることが可能である。
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Strategy for Future Research Activity |
髄鞘化が誘導されることが示唆されたアセチル-L-カルニチン(O-Acetyl-L-carnitine hydrochloride)の投与ラットを作成し、MBP免疫染色による解析(陽性面積・密度測定)を行うとともに、電子顕微鏡標本を作成し電子顕微鏡下での観察および解析(有髄線維の数・髄鞘の厚さ)を行う。
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