2018 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of the medaka intestinal atresia mutant
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15K08139
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
小林 大介 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (60376548)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 管腔形成 / 腸管閉鎖 / メダカ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
腸管閉鎖症は、先天的に腸の一部が閉鎖・狭窄する疾患である。本研究では、胚発生期に腸管閉鎖を示すメダカ突然変異体を用い、その遺伝的要因と、発症のメカニズムを明らかにすることを目的としている。
前年度までに、シート状の内胚葉組織から腸管の管腔構造が完成した直後の発生ステージで、腸管閉鎖が生じる部位の上皮においてにF-actinが異常集積することや、ミオシンIIの阻害剤であるBlebbistatinを用いて腸管閉鎖を抑制できることを明らかにしてきた。本年度は腸管閉鎖の原因を明らかにするために、以下の2点について検討した。
（１）アポトーシスの関与：腸管閉鎖を示す直前の、F-アクチンの異常集積が観察されたステージにおいて、TUNEL法によるアポトーシスの検出を試みた。その結果腸管閉鎖を生じる腸管上皮の部位において、アポトーシスのシグナルは観察されなかった。このことから変異体胚の腸管閉鎖にはアポトーシスは関与していないと結論付けられた。
（２）上皮間葉転換の関与：腸管閉鎖の際にアクチンの細胞内動態が変化していることに加え、基底膜の断片化が観察されていることから、上皮間葉転換の関与について検討した。上皮間葉転換の際に発現が亢進する遺伝子として知られているsnail、matrix metalloproteinaseの発現変化をin situハイブリダイゼーション法を用いて解析した。その結果いずれの遺伝子も顕著な発現上昇は観察されず、野生型胚との間に差は見られなかった。以上のことから変異体胚で観察される腸管閉鎖に、上皮間葉転換は関与していないと結論付けられた。
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