2017 Fiscal Year Annual Research Report
micro RNA as the master key for protection of oxidative stress
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15K08244
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| Research Institution | Teikyo University |
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Principal Investigator |
中木 敏夫 帝京大学, 医学部, 教授 (30164148)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青山 晃治 帝京大学, 医学部, 准教授 (00420943)
押鐘 浩之 帝京大学, 医学部, 助教 (10727283)
松村 暢子 帝京大学, 医学部, 助教 (30317698)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | EAAC1 / GTRAP / glutathione |
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| Outline of Annual Research Achievements |
神経細胞内グルタチオン量の維持にとって必須であるEAAC1は細胞形質膜に発現しており、microRNA-96-5p およびGTRAPによって抑制されている。さらにGTRAPもmicroRNA-96-5pによって制御されていることが判明した。しかし、GTRAPの遺伝子には、その塩基配列から判断する限りはmicroRNA-96-5pの結合部位がない。したがって、microRNA-96-5pは別のタンパク質を介してGTRAPの発現量を制御している可能性が高いと考えられた。GTRAP遺伝子の3’非翻訳領域に結合するタンパク質を磁気ビオチン・アビジンによってスクリーニングした。ビオチン・アビジン系のみでも非特異的なバンドが極めて大量に現れた。これらのバンドを回収してTOF-MASSによるタンパク質のアミノ酸分析からタンパク質候補を推定することを試みた。しかし、TOF-MASSによる理論的候補となるタンパク質は数が膨大になり、さらに結果が確率で表現されるため、さらに候補を絞り込む作業は難航を極めた。さらに進めるための理論的根拠として、神経機能および酸化ストレスへの関連性、およびmicroRNA-96-5pの結合部位の有無等を検討することにより、有力候補を複数に絞り込み（仮称タンパク質B群）、さらにタンパク質B群の発現がmicroRNA-96-5pによって制御されているかを確認した後に、１種類の最有力候補(C)に絞った。このタンパク質Cの発現をsiRNAによって抑制したところ、GTRAPの発現が増加することを確認した。
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