2015 Fiscal Year Research-status Report
エロンガンAの標的遺伝子の同定と伸長／ユビキチンリガーゼ両機能間の変換機構の解明
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15K08279
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
麻生 悌二郎 高知大学, 教育研究部医療学系, 教授 (20291289)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | Elongin / 転写伸長 / RNAポリメラーゼII / ユビキチンリガーゼ / small nuclear RNA / non-coding RNA / 胚様体 / レチノイン酸 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. 神経分化制御におけるElongin Aの標的遺伝子の同定
野生型およびElongin A-/- 型のマウスES細胞をレチノイン酸（RA）非添加で4日、添加して4日の計8日間培養して胚様体を形成させた。培養開始前、開始後4日、6日ならびに8日目のES細胞あるいは胚様体を回収し、ゲノムDNAとタンパク質をクロスリンクさせ断片化した後、抗Elongin A抗体を用いてElongin A/RNAポリメラーゼII/DNAから成る複合体を免疫沈降させた。沈降物を脱クロスリンクした後DNAを精製し、共同研究者のJoan Conaway博士が在籍するStowers Institute（米国）に設置のHiSeq 2000により塩基配列を決定した。Input DNAを対照として解析した結果、β-actin、GAPDH等のhousekeeping遺伝子上にはRA添加の有無に関わらずほぼ同等のElongin Aの集積が認められたが、homeobox遺伝子群に属するいくつかの遺伝子においては、RA添加前はほとんど集積がないのに対してRA添加後に著しい集積の増加が認められることが判明した。また、small nuclear RNA（snRNA）やsmall nucleolar RNA（snoRNA）をコードする遺伝子のいくつかにおいては、RA添加前も一定の集積を認めるが、RA添加後にElongin Aの有意な集積の増加が認められることが判明した。
2. DNA傷害（-）型転写抑制によるEloAのE3機能活性化に関わる因子の同定
1.の課題の推進に全エフォートを傾けたため、着手できていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
抗Elongin A抗体と抗pol II（N20）抗体とを用いたChIP-sequence解析を実施し、Elongin Aがhomeobox遺伝子群のみでなく、snRNA遺伝子やsnoRNA遺伝子等、複数のnon-coding RNAをコードする遺伝子上に顕著な集積を認めることを確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
抗Elongin A抗体を用いて実施したChIP-sequence解析の結果、Elongin Aがhomeobox遺伝子群のみでなく一群のsmall nuclear RNA遺伝子の発現をも制御している可能性が高くなったため、当初予定していた「DNA傷害（-）型転写抑制によるElongin AのE3機能活性化の機構の解明」の課題は実施せず、代わりに「レチノイン酸刺激によるElongin Aのhox遺伝子ならびにsmall nuclear RNA遺伝子上へのリクルートメントの機構の解明」の課題を実施することとした。
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[Journal Article] Assembly of the Elongin A ubiquitin ligase is regulated by genotoxic and other stresses.2015
Author(s)
Weems J.C., Slaughter B.D., Unruh J.R., Hall S.M., McLaird M.B., Gilmore J.M., Washburn M.P., Florens L., Yasukawa, T., Aso, T., Conaway, J.W., and Conaway, R.C.
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Journal Title
J. Biol. Chem.
Volume: 290
Pages: 15030-15041
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
