2017 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of cellular senescence molecular mechanism through function analysis of tumor suppressor gene (PITX1) .
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15K08304
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
久郷 裕之 鳥取大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40225131)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | PITX1 / テロメレース / 細胞老化 / SASP / OIS / テロメア |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度はPITX1のSASP経路への関与をより詳細に明らかにする目的で、①PITX1の下流で機能する遺伝子の解析、②Pitx1 CKOマウスの作製および③PITX1発現に関わる化合物の同定を目指した研究を行った。
①については、分子シグナル伝達系におけるPITX1の下流遺伝子を特定するために、FLAGタグによるプルダウン解析に加えて、遺伝子活性化マーカーであるH3K27アセチル化抗体によるChIP-seq法によって網羅的な解析を試みた。その結果、IL-6とIL-8の発現を正に制御する遺伝子Aの発現上昇と、負に制御する遺伝子Bを候補として獲得した。次に、より直接的なPITX1によるSASP経路への関与を解析するために、メラノーマ細胞株A2058へPITX1を強制発現する実験を行った結果、遺伝子Aの発現上昇、遺伝子Bの発現低下とともにIL-6およびIL-8の発現上昇と細胞老化マーカーであるp16とp21の発現上昇が認められた。以上の結果から、SASPとPITX1を結ぶ新規分子経路の存在が示された。
②については、文部科学省の動物作製支援のもと、Cre/loxPによって欠損させることできるマウスES細胞(Pitx1 CKO ES細胞)を樹立し、3匹状態の良いキメラマウスが得られた。この内2匹から受精卵を作製し、さらにこの受精卵にFlp mRNAをエレクトロポレーションによって導入した。続いて、ICRの仮親に移植することで、Pitx1 CKOアレルをもつマウス雌5匹と雄2匹を作成できた。Creマウスと掛け合わせてPitx1 CKOマウスの作製を行っている。
③PITX1機能促進に関わる化合物の同定
データベースおよび文献検索からソラフィニブおよびレゴラフィニブを、PITX1の発現を誘導しうる低分子化合物として同定した。現在、実際にPITX1の発現を変化させるかどうか検討を行っている。
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[Book] 生体の科学2017
Author(s)
片岡 美喜, 久郷 裕之
Total Pages
6ページ
Publisher
医学書院
ISBN
0370-9531
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