2015 Fiscal Year Research-status Report
白血球の遊走方向を制御する細胞極性蛋白質複合体の作用機構
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15K08309
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
鎌倉 幸子 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80398081)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 細胞極性 / 白血球 / ケモタキシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
好中球は、私たちの体を循環する末梢白血球の約６割を占める細胞であり、その役割は体内に侵入した真菌や細菌などの外来微生物を、貪食し殺菌することである。私たちの体は常に外界からの微生物の侵入にさらされており、好中球が10分の1に減少すると無菌室に入らなければ生きていくことができない。このように好中球がヒトの生命を守るためには、ケモタキシス（chemotaxis）により微生物の侵入部位/炎症部位へ素早く到達することが不可欠である。しかしながらどのように好中球が「正確に」目的地にたどり着くのか、その分子機構は不明な点が多い。申請者は最近、好中球の遊走方向を制御するGPCR下流の新しいシグナル経路を明らかにした (Kamakura et al., Dev. Cell, 2013)。本研究では、この新規なGPCRシグナルの最も下流で機能するキナーゼ (atypical protein kinase C: aPKC) の基質を同定し、好中球が遊走方向を制御するための分子機構を明らかにする。H27年度は、大腸菌内でPar6とaPKCとを共発現し、複合体として精製を行うことで、性質の良い全長のGST－aPKC蛋白質を得ることができた。さらに、好中球のcell lysate を用いて、このPar6/GSTーaPKC 複合体でGSTーpulldown を行い、mass spectrometry 解析をすることにより Par6－aPKC結合蛋白質の候補を得ることができた。また、3次元環境下での遊走を解析するために、コラーゲンを用いたchemotaxis assay 系を立ち上げることができた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請時の実験計画通りに、順調に研究を進めることができているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
mass spectrometry 解析によって得られたPar6－aPKC結合蛋白質の候補分子について、PLB-985細胞株を用いたCRISPRーCas9による遺伝子欠失や、siRNAをによるノックダウンを行い、遊走の軌跡の解析を引き続き行う。さらに、ケモタキシスへの影響について、本年度立ち上げた3次元のchemotaxis assay 系を用いて解析を行う。
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