2016 Fiscal Year Research-status Report
LentiPlexを利用したTN乳癌の新たな組織学的亜分類の試み
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15K08339
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
小山 徹也 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (50233622)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | TNBC / LentiPlex / CASP14 / IGF2BP3 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
材料と方法: 約1万5千の遺伝子に対する網羅的shRNAライブラリーであるLentiPlexをBasal-like TNBC (MDAMB468 HCC7O HCC1143）とnon-TNBC (MCF7 T-47 DBT474）の細胞株に対して、ウイルスの導入率が30-50％になるようにinfectionさせ 、次世代シークエンサーを用いて細胞内に 残存するshRNAを同呈することにより Basal-like特異的に細胞障害性を持つshRNA候補の抽出を試みた。いくつかの候補が同定された。今回はさらにTNBC細胞株3株、non-TNBC細胞株3株を用いてTNBC高発現遺伝子をRNAシークエンス法で検索し、さらに公共データベースRefExを利用して正常組織で低発現である遺伝子をTNBC特異的高発現遺伝子として同定した。上記の２つの方法で重複して同定されたTNBC特異的治療候補であるCaspase-14およびIGF2BP3に関して乳癌の症例における発現を免疫染色で評価し、また培養細胞を使った発現抑制、増殖抑制試験を行った。
結果: CASP14は主に癌細胞質、核内で発現し非癌乳腺組織、間質細胞では低発現であった。またCASP14高発現群(65/248)はTNBC症例で有意に多くRNA sequencingの結果を検証することができた。CASP14高発現群は低発現群と比較して ER陰性、EGFR高発現、Ki67 LI高値症例が有意に多く、癌の悪性度との関連が示唆された。CASP14発現はdatabase、解析では乳癌患者の予後とは有意な関連が見られた。IGF2BP3は免疫染色で高発現群(89/214)はTNBC症例で有意に多く、悪性度との関係が示され、また培養細胞株を用いた検討ではTNBC株での増殖抑制が確認された。さらに検討中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
今回網羅的RNA解析を加えたことにより、LentiPlex単独解析より、確実な候補が検出された。特に２つの標的候補（CASP14, IGF2BP3)のTNBCのBiomarkerとして、特にCASP14およびIGF2BP3のTNBCにおける悪性度との関係が確認された。また治療標的としての可能性が示唆された。また治療標的としての高い有用性が確認された。
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| Strategy for Future Research Activity |
今回の２つの候補遺伝子同定の方法による解析により、より精度の高い候補遺伝子が同定された。さらなる解析を続ける予定である。
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| Causes of Carryover |
今回消耗品代金が、計画ほどではなかったため、残金が生じた。細胞培養施設に関しては徐々に整備している。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
計画の最終年度で、候補遺伝子に関して積極的に検討する予定である。また培養細胞を用いた研究も積極的に行う予定である。
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[Journal Article] Caspase14 expression is associated with triple negative phenotypes and cancer stem cell marker expression in breast cancer patients2017
Author(s)
Tadashi Handa, Ayaka Katayama, Takehiko Yokobori, Arito Yamane, Jun Horiguchi, Takaaki Fujii, Reika Iwakawa-Kawabata, Shinji Yoshiyama, Susumu Rokudai, Pinjie Bao, Navchaa Gombodorj, Halin Bao, Bolag Altan, Kyoichi Kaira, Takayuki Asao, Hiroyuki Kuwano, Masahiko Nishiyama, and Tetsunari Oyama
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Journal Title
Journal of Surgical Oncology
Volume: in press
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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