2015 Fiscal Year Research-status Report
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15K08448
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
矢幡 一英 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助教 (40467965)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | マラリア / 赤血球侵入 / メロゾイト |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マラリア原虫は宿主体内で赤血球への再侵入を繰り返すことで増殖する。マラリア原虫は赤血球にRONと呼ばれる原虫分子群を挿入し、原虫表面に発現するAMA1との間で形成される複合体により原虫膜と赤血球膜を架橋することで、赤血球内に侵入する。本複合体の形成を阻害すると侵入が阻害されるため、申請者は本複合体形成の過程を詳細に解析することで、原虫の侵入・増殖を阻害する新たな切り口を見出すことができると考えた。本研究では、本複合体構成分子をコンディショナルにノックアウトし、赤血球侵入前後での各分子の経時的局在変化と複合体形成の有無等を検討することで、AMA1-RON複合体を構成する各分子の機能を明らかにすることを目的とする。
本年度は、AMA1-RON複合体の一つであるRON5をネズミマラリア原虫を用いて遺伝子ノックアウト原虫の作出を試みた。しかしながら、遺伝子組換え原虫を得ることが出来なかったため、RON5はネズミマラリア原虫に必須な遺伝子であることが示唆された。RON5を含め、AMA1-RON複合体が赤血球のどの段階で必要なのかを調べるため、現在ネズミマラリア原虫でコンディショナルノックダウン/アウトシステムを構築中である。また、赤血球侵入型原虫であるメロゾイトを効率良く精製する必要があるため、ネズミマラリア原虫を用いた精製法を確立し、さらに感染力を維持したメロゾイトを精製する方法を開発した（Mutungi J. et al., Molecular & Biochemical Parasitology 2015）。さらに、赤血球侵入時に関わるカルシウムの局在と濃度を測定するため、カルシウムセンサーとしてYellow Cameleon-Nanoをマラリア原虫に導入し、カルシウムセンサーの有効性を実証した（Pandey K, et al., Scientific Reports 2016)。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
赤血球侵入時の現象を精査するために必要な、ネズミマラリア原虫からメロゾイト抽出法とカルシウムイメージング法を確立した。コンディショナルノックダウン/アウトシステムは構築中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成28年度は引き続きネズミマラリア原虫でのコンディショナルノックダウン/アウトシステムを構築する。さらに熱帯熱マラリア原虫においてもコンディショナルノックアウトシステムを拡張し、AMA1-RON複合体の赤血球侵入時における必要性を精査する。
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| Causes of Carryover |
論文掲載費等の支払いが次年度に繰り越しになったため
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
論文掲載費等に使用予定
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[Journal Article] Asada M, Yahata K, Hakimi H, Yokoyama N, Igarashi I, Kaneko O, Suarez CE, Kawazu SI. Transfection of Babesia bovis by double selection with WR99210 and Blasticidin-S and its application for functional analysis of thioredoxin peroxidase-12015
Author(s)
Asada M, Yahata K, Hakimi H, Yokoyama N, Igarashi I, Kaneko O, Suarez CE, Kawazu SI
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Journal Title
PLOS One
Volume: 10(5)
Pages: e0125993
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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