2016 Fiscal Year Research-status Report
ボツリヌス神経毒素結合タンパク質NTNHAの体内侵入に寄与する生体分子の解明
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15K08474
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture |
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Principal Investigator |
相根 義昌 東京農業大学, 生物産業学部, 教授 (00624660)
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2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 細胞内輸送 / ボツリヌス毒素 / アクチンフィラメント / 抗体 / 非毒非血球凝集素 / ミオシン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、ボツリヌスD型非毒非血球凝集素（NTNHA）を特異的に検出するペプチド抗体を作製した。すなわち、D型NTNHAの部分アミノ酸配列を有するペプチドを作製、これを用いてウサギに対して免疫し、その抗血清を得た。得られたペプチド抗体をウエスタンブロッティングに供したところ、NTNHAタンパク質を特異的に検出することに成功した。
一方、ラット小腸上皮株化細胞IEC-6に対し、NTNHAを添加し、一定時間経過させた後、NTNHA抗体を用いて蛍光免疫染色法により、NTNHAを検出したところ、細胞内に侵入したNTNHAを検出することにも成功した。昨年度の研究成果と同様、細胞内に侵入したNTNHAは、アクチンフィラメントと共存していることが検出され、NTNHAが、アクチンフィラメントに沿って細胞内を輸送されている可能性が示された。さらに、アクチンフィラメント上の輸送に関わると考えられるミオシン分子の抗体を用いて、「アクチン-ミオシン-NTNHA」の細胞内局在を調べたところ、３者が共存していることが検出され、NTNHAの細胞内輸送には「アクチン-ミオシン」系が関与していることが示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究の目的であるNTNHAの細胞内輸送に係る細胞内システムが明らかとなったことにより、細胞内侵入ー細胞内輸送の経路の解明が進んでいるといえる。
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| Strategy for Future Research Activity |
Rabタンパク質抗体を用い、NTNHAの細胞内輸送に係る小胞を特定するとともに、細胞内侵入の上流である細胞内侵入経路についての推測を行い、その特定を行う。
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| Causes of Carryover |
使用する予定であった消耗品の価格低下のため、支出が減少した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
細胞培養に係る消耗品の購入に当て、研究に使用する予定である。
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Research Products
(6 results)
