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2017 Fiscal Year Annual Research Report

Development and clinical application of quantity profile analysis to inflammatory allied transcription factor activity by fluorescence correlation spectroscopy

Research Project

Project/Area Number 15K08612
Research InstitutionUniversity of Toyama

Principal Investigator

北島 勲  富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (50214797)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 仁井見 英樹  富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 准教授 (50401865)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords転写因子 / プロファイル解析 / NF-κB / AP1 / DNA-転写因子結合アレイ法 / 蛍光相関分光法
Outline of Annual Research Achievements

炎症性疾患、がん、生活習慣病等は組織間、細胞間のネットワークの異常が病因となる。さらにこの異常は、細胞内シグナル伝達の異常から生じる。細胞内情報は転写因子に集約されるため、転写因子活性化を病態解析に活用する検査法開発に取り組んできた。本研究では、ELISA法による転写因子活性解析と転写因子DNAアレイ法を超えるハイスループット転写因子活性化プロファイル検査法を探索し、蛍光相関分光法(FCS法)を転写因子活性化検査法を新たに構築した。FCS法は溶液中の分子間相互作用を1分子レベルで解析でき、生体内で生じる液相反応でかつホモジニアスアッセイ(洗浄工程不要)のため迅速性が確保できる特徴があるが臨床検査領域への応用例が少ない。本研究は1)NF-κB,NF-IL6(C/EBP)、ATF(C/EBP)、SP1、AP1、NF-ATに特異的に結合できるDNAプローブを作成した。2)患者血液からカラムを用いて迅速にリンパ球を分離し高品質な核蛋白を抽出し、蛍光標識転写因子結合DNAプローブと反応させた。オリンパス社MF20測定機器を用いた2成分解析プログラムによる各転写因子リコンビナント蛋白を基準にした検量線より定量化するFCS法転写因子活性測定プロトコールを策定した。3)添加回収試験にて種々の蛋白質が存在する核抽出液中の転写因子に対して特異的に検出するにはELISA法よりFCS法が優れていることを明らかにした。4)FCS法の転写因子活性化定量法の検証は、Jurkat cellに対してTNF-α、LPS、PMA+Ionomycinで刺激2時間すると、TNF-α刺激でNF-κB活性が1.27倍、PMA+Ionomycin刺激でNF-κBが1.49倍、AP-1が1.62倍、NF-ATが1.23倍の増加を認めた。以上より、FCS法の臨床応用に向けた基盤を確立することができた。

  • Research Products

    (9 results)

All 2018 2017

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results) Presentation (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 1 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (4 results) (of which Overseas: 1 results)

  • [Journal Article] Serum biomarkers in patients with ossification of the posterior longitudinal ligament (OPLL):-inflammation in OPLL.2017

    • Author(s)
      Kawaguchi Y, Nakano M, Yasuda T, Seki S, Kayo Suzuki K, Yahara Y, Makino H, Kitajima I, Kimura T.
    • Journal Title

      PLOS ONE

      Volume: 12(5) Pages: e0174881

    • DOI

      10.137/journal.pone.0174881

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Spondylodiscitis due to Parvimonas micra diagnosed by the melting temperature mapping method.2017

    • Author(s)
      Higashi Y, Nakamura S, Niimi H, Ueno T, Matsumoto K, Kawago K, Sakamaki I, Kitajima I, Yamamoto Y
    • Journal Title

      BMC infectious diseases

      Volume: 17(1) Pages: 584

    • DOI

      10.1186/s12879-017-2690-4

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] 感染症検査の新たな潮流2017

    • Author(s)
      仁井見英樹
    • Journal Title

      臨床化学

      Volume: 46(1) Pages: 190

  • [Presentation] Tm Mapping. A novel testing method for rapid bacterial identification without blood culture.2017

    • Author(s)
      Miimi H, Kitajima I
    • Organizer
      Singapore international infectious disease conference. 2017
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Book] 臨床検査データブック2018

    • Author(s)
      北島勲(高久史麿監修)
    • Total Pages
      1049
    • Publisher
      医学書院
    • ISBN
      978-4-260-02826-4
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 血液中の起炎菌をATP測定するための血液検体の前処理方法2017

    • Inventor(s)
      仁井見英樹、北島勲、杉江和茂、上野智浩
    • Industrial Property Rights Holder
      仁井見英樹、北島勲、杉江和茂、上野智浩
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2017-219547
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 感染症患者検体中の細菌数を16S ribosomal RNA 遺伝子コピー数 で迅速・正確に定量する検査技術2017

    • Inventor(s)
      仁井見英樹、北島勲、宮腰晃央、東祥嗣
    • Industrial Property Rights Holder
      仁井見英樹、北島勲、宮腰晃央、東祥嗣
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2017-246333
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 感染症患者検体中の細菌数を迅速かつ正確に定量する検査技術2017

    • Inventor(s)
      仁井見英樹、北島勲、宮腰晃央、東祥嗣
    • Industrial Property Rights Holder
      仁井見英樹、北島勲、宮腰晃央、東祥嗣
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2017-246724
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 改良Tmマッピング法2017

    • Inventor(s)
      仁井見英樹、大槻晋也、北島勲
    • Industrial Property Rights Holder
      仁井見英樹、大槻晋也、北島勲
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2017-246724
    • Overseas

URL: 

Published: 2018-12-17  

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