2016 Fiscal Year Research-status Report
特異的ナノビーズを用いる乳癌個別化エストロゲンシグナルバイオマーカーの探索
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15K08637
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
丹羽 俊文 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (90218248)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 慎一 東北大学, 医学系研究科, 教授 (60144862)
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| Project Period (FY) |
2015-10-21 – 2018-03-31
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| Keywords | 乳癌 / ナノ材料 / エストロゲン受容体 / バイオマーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
28年度の研究は，引き続き膜型エストロゲン受容体(mER)発現細胞の樹立を行うとともに，メカニズムを異にする種々のホルモン療法耐性モデル細胞株を用い，mERの関与の有無について解析した。
・ER遺伝子上から核移行に必要なドメイン(NLS)を除去し，さらに脂質が付加しやすい配列を挿入したコンストラクトを調製し，核内ER陰性の細胞に導入を試みたが，空ベクターでは問題がないもののER発現ベクターの導入が困難であった。そこで，宿主細胞側に問題がある可能性を考慮し，本来ER陽性であるMCF-7細胞で核内ERを消失したfulvestrant耐性株(MFR細胞)を宿主細胞に利用した。新たに調製したベクターをMFR細胞に導入したところ，安定導入株が得られた。細胞分画によりERの局在を確認したところ，核にも存在が認められるものの，細胞質，細胞膜に分布が多かった。引き続きこの細胞株を用いて特異的リガンドの作用を検討していく。
・これまでに申請者らが確立したメカニズムを異にする種々のホルモン療法耐性モデル細胞株について，mERの関与を検討したところ，核内ERの機能を維持している細胞株はいずれもmER特異リガンドに応答し，核内ER蛋白またはその機能を消失した株では応答がみられなかった(両タイプとも複数株で確認)。このことから特異的リガンドで刺激されるmERは，候補として議論されているいくつかの分子のうちERαである可能性が示された。
・トリプルネガティブ型，HER2型，ルミナール型，および各種ホルモン療法耐性モデル株について，mERの候補とされているERα66(野生型)，ERα36(バリアント)，GPR30の発現を調べたところ，ERα66の発現のみが特異リガンドへの応答と一致しており，他は不応答株でも発現が認められたことから，特異リガンドに応答しているのはERα66であると考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
28年度計画の主要部分は膜型ER信号経路とホルモン療法耐性との関わりである。
(1) mER発現細胞株の樹立では，宿主細胞を非ルミナール型細胞から核ER発現を失ったルミナール型由来のER陰性細胞に切り替えることで，安定導入株を樹立できた。今後膜型ER信号系を解析していく上で有用なツールとして期待できる。
(2) メカニズムの異なる複数のホルモン療法耐性モデル株について膜型ER特異的リガンドに対する応答性を検討し，リガンドに対する応答と核内ERの発現が密接に関わっている可能性を示した。また，特異的リガンドが作用している分子はERα66(野生型)である可能性が示された。
(3) 患者手術検体から得られたprimary cultureを用いて，特異的リガンド作用の検討を試行した。
以上概ね28年度の計画に添って進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
29年度は樹立されたmER発現細胞株をツールとして用い，特異的リガンドとエストラジオールへの応答の差や分子標的薬によって細胞内信号を遮断することでこの信号系の解析を勧めていく。また，患者検体が入手できた際にはprimary cultureに対して特異的リガンドを添加して応答を解析し，実際の症例におけるmERの寄与について検討する。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額は，平成27年度からの繰越し額に加え，今年度の研究を効率的に推進したことに伴って発生した未使用額である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成29年度請求額と併せて29年度に計画している研究の遂行に使用する予定である。
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| Remarks |
「こんな研究をしています」「学会発表」「学位論文・卒業研究」のページに関連の記載有り。
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Research Products
(2 results)
