2015 Fiscal Year Research-status Report
無承認無許可医薬品・ハーブ中のアルカロイドの新規高感度・迅速分析法の開発
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15K08818
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| Research Institution | Iwaki Meisei University |
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Principal Investigator |
山崎 勝弘 いわき明星大学, 薬学部, 教授 (20250334)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | アルカロイド / 固相抽出 / エフェドリン / NBD-F / 蛍光誘導体化試薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（1）アルカロイドの固相抽出法を用いた分析法の確立：強い抗コリン作用を持つロートエキス中のアトロピン及びスコポラミンの定量法を固相抽出法で検討した。製剤中のアトロピンとスコポラミンの定量分析に、強陽イオン交換と逆相の両方の性質を持つ固相カートリッジOasis MCXを用いてクリーンアップし、HPLCで分析した。カートリッジの洗浄に水/メタノール/アンモニア混液を用いることで、分析の妨害となるほとんどの夾雑物質が簡便に除去できた。これらの手法によって、市販製剤中に非常に微量に含有するAt及びScを簡便・迅速に定量することが可能になり、それらの品質評価に役立てることが出来るものと考えられる。
（2）蛍光ラベル化法によるアルカロイド成分の分析法の確立：アミノ酸などアミノ基を有する成分分析には種々のラベル化試薬が用いられ、定性・定量に用いられている。我々は、今回、確認試験が困難である生薬成分中のアルカロイドを高感度で検出するために、試料抽出液にNBD-F（4-fluoro-7- nitrobenzofurazan）試薬を用いて発色させ、さらに蛍光を測定し、配合生薬固有の確認試験ができるかについて検討した。生薬や製剤中のアルカロイドは、NBD-Fによって誘導体化され赤色に変化し、これを500 nmで測定した。エフェドリン類のうち、ℓ-エフェドリン（1級アミン）、ノルエフェドリン、ｄ－プソイドエフェドリン（いずれも2級アミン）の3つが高感度で定量できることが明らかになった。しかし、3級アミンであるメチルエフェドリンはNBD-Fでは標識されなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
胃腸薬製剤中のトロパンアルカロイドであるアトロピン及びスコポラミンの分析法を固相抽出法で検討した。製剤中のアトロピンとスコポラミンの定量分析に、強陽イオン交換と逆相の両方の性質を持つ固相カートリッジOasis MCXを用いてクリーンアップし、HPLCで分析した。試料にロートエキスを配合する胃腸薬5品目を用いて、製品中のアトロピン及びスコポラミンを分析した洗浄に水/メタノール/アンモニア混液を用いることで、分析の妨害となるほとんどの夾雑物質が簡便に除去できた。これらの手法によって、試料中に非常に微量に含有するアトロピン及びスコポラミンを簡便・迅速に定量することが可能になり、それらの品質評価に役立てることが出来るものと考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
蛍光ラベル化法によるアルカロイド成分の分析法の確立：(1) エフェドリン類については，新しい分析法として，アミノ基に特異的に結合する蛍光誘導体化試薬であるNBD-F等を用いて，蛍光検出器- HPLC分析法を用いて高感度かつ特異的な分析法を検討する。本分析法においては，エフェドリンアルカロイドを含有する漢方エキスを用いて、妨害成分の有無も検討する。
(2)NBD-Fとそれ以外の蛍光ラベル化試薬を用いて，分析可能なアルカロイドを網羅的に検索する。特に1級アミン及び2級アミンを持つ物質に特異的に反応することが予想されるが，実際にその分析法がどのアルカロイドに適用可能であるかを検討する。要するに，本手法が実際に適用できる範囲を検討し，それらの分析法を確立していく。
(3)蛍光ラベル化試薬で反応しないアルカロイドについての検討を行う。3級アミンからなるアルカロイドについては，直接，蛍光ラベル化試薬のN（窒素）への結合が困難であることが予想されることから，窒素部位を2級アミンに変換（結合の切断等）後，蛍光ラベル化試薬を結合させることを検討する。
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| Causes of Carryover |
ハード面での実験準備が遅れたため、試料の購入を遅らせる必要が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究が予定通りに進行するように、実験の遅れを取り戻す。
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