2015 Fiscal Year Research-status Report
血清分泌型マイクロRNAを用いたソラフェニブ治療効果予測マーカーの開発
| Project/Area Number |
15K09028
|
|---|
| Research Institution | Kinki University |
|---|
Principal Investigator |
工藤 正俊 近畿大学, 医学部, 教授 (10298953)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西田 直生志 近畿大学, 医学部, 准教授 (60281755)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | マイクロRNA / 肝細胞癌 / ソラフェニブ / バイオマーカー / エクソソーム |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】血中には脂質に包まれたmicroRNA (miR)が存在し、エクソソームを介して受容側細胞で機能する分泌型も知られている。我々は血中miR profile変化が肝癌の薬剤感受性に影響する場合を想定し、ソラフェニブ効果を予測しうるmiRの探索を試みた。
【方法】ソラフェニブ治療された進行肝癌のうち、3ヶ月以上PRの持続した8例(PR群)、および1ヶ月目でPDと判定された8例(PD群)の治療前血清を用い、既報より血清中での存在が報告された179種のmiRで、両群で差のあるものを選択した。微量のmiRを安定して検出するためlocked nucleic acidを用いたリアルタイム定量PCR(qPCR)を用い、referenceとして血清中に安定して存在する5種のmiR (miR-95-5p, miR-103a-3p, miR-191-5p, miR-423-3p, miR-425-5p）を定量し、その平均値とターゲットmiRとの差(ΔCq)を求めた。溶血マーカーとしてmiR-16、miR-451、miR-23aを定量し、血球由来のmiRの影響を排除した。
【成績】PR群とPD群の比較により、179種のmiRのうち、Mann-Whitney 多重U検定9種のmiRで血清中量の差が認められた（p値=0.0023～0.0578）。このうち増幅効率の良い5種のmiR(ΔCq<6)を選び、現在、53例のソラフェニブ治療前の肝癌、8例の年齢をマッチさせた健常者の血清で解析中である。
【結論】ソラフェニブ治療された進行肝癌のうち、3ヶ月以上PRの持続した8例(PR群)、および1ヶ月目でPDと判定された8例(PD群)において、血清中での量に差があるmiRが検出された。またlocked nucleic acidを用いた血清中miRは再現性が良く、微量血清から安定した測定が可能であった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
血中miR定量における問題点として(1)血中に存在するmiRが微量である、(2)溶血や白血球、血小板由来miRの影響が含まれる、(3)組織崩壊によるapoptotic body由来のmiRが含まれる、(4)一般的なリファレンス遺伝子（定量のコントロール）が血清中に含まれていない、等の問題がある。我々は今年度の成果により、血清中のmiRの定量にあたり、(1) locked nucleic acid(LNA)を含むprimerを用い、特異度、感度を改善、(2) 血球由来miR を定量し、血球由来のmiRの多いサンプルを排除しsample qualityを担保、(3) 分泌型として報告されたmiRを評価対象とする、(4) 血清中に十分量の存在が確認されている5種のmiR (miR-95-5p, miR-103a-3p, miR-191-5p, miR-423-3p, miR-425-5p)の平均Cq 値をRealTime PCRで求め、これを基準として測定サンプルとの差（ΔCq）を定量する、という方法を用いた。PR群とPD群で治療前血清において含量に差が認められたmiR（候補となるmiR）として、Mann-Whitney U-testの p値<0.0578 かつ Mean ΔCq < 6を満たすものを選んだ。その結果5種のmiR (hsa-miR-148b-3p、 hsa-miR-339-5p、hsa-miR-33a-5p、hsa-miR-181a-5p、hsa-miR-17-5p)が抽出された。今後はソラフェニブへの反応性がすでに明らかな53例の肝癌の血清での解析を進めることができ、また安定した定量が可能であることが明らかとなったため、順調に進捗していると考えられる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今回、網羅的め血清中miRn解析から5種のmiRがソラフェニブの早期反応を反映するバイオマーカーとして選択された。次のステップとして、53例のソラフェニブ治療を受け、その3ヶ月後の反応性が分かっている肝癌の治療前の血清、8例の年齢をマッチさせた健常者の血清で選択したmiRを解析する。
評価方法としてmRECISTを用い、評価項目として"治療開始1ヶ月目の治療効果"、および"3ヶ月間の腫瘍制御(PR/SD)の持続"を用いる。すなわち、1ヶ月目でPR/SD かつ 3ヶ月目でPR/SDの例を” 3ヶ月間の腫瘍制御あり”、 1ヶ月目でPD もしくは 3ヶ月目でPDの例を” 3ヶ月間の腫瘍制御なし”と定義し、今回選択した5種のmiRのなかで、上記の反応性を予測しうるmiRを選択する。また健常者のmiRレベルを定量し、選択したmiRが腫瘍進展の抑制、もしくは促進にはたらくmiRであるかを判断する。腫瘍の臨床背景とともに、これらのmiR濃度を多変量解析し、治療効果を独立して予測しうる因子であるかを判定する。またreferenceとして用いるmiRの組み合わせを変えてinter assay variationを%CVをもとに算出した判定し、もっとも%CVの小さい、すなわちinter assay variationの低い測定系を開発する。
さらに、肝癌細胞株を用いて、抽出したバイオマーカー候補としてのmiRをノックイン、ノックダウンすることにより、それらのmiRの癌化における意義を解析する。
|
| Causes of Carryover |
本年度の解析で抽出した5種のmiRの定量を、53例のソラフェニブ使用前の肝癌症例、およびコントロールの血清を用いて、locked nucleic acid primerを使用したリアルタイムPCRにて行う予定であり、このカスタムパネルを作成中であるが、本年度にその作成が間に合わず、納品が遅れている。そのため、次年度使用額が生じた。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度には、現在作成中の5種のmiRの定量に特化したカスタムパネルの支払いが必要である。及びそのためのRNA抽出、逆転写酵素、リアルタイムPCRに必要な試薬代等が必要なため、その支出のために使用する計画である。
|
-
[Journal Article] Effectiveness of Sorafenib in Patients with Transcatheter Arterial Chemoembolization (TACE) Refractory and Intermediate-Stage Hepatocellular Carcinoma.2015
Author(s)
Arizumi T, Ueshima K, Minami T, Kono M, Chishina H, Takita M, Kitai S, Inoue T, Yada N, Hagiwara S, Minami Y, Sakurai T, Nishida N, Kudo M.
-
Journal Title
Liver Cancer
Volume: 4
Pages: 253-62
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Validation of a Modified Substaging System (Kinki Criteria) for Patients with Intermediate-Stage Hepatocellular Carcinoma.2015
Author(s)
Arizumi T, Ueshima K, Iwanishi M, Minami T, Chishina H, Kono M, Takita M, Kitai S, Inoue T, Yada N, Hagiwara S, Ida H, Minami Y, Sakurai T, Kitano M, Nishida N, Kudo M.
-
Journal Title
Oncology
Volume: 89
Pages: 47-52
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Balloon-Occluded Transcatheter Arterial Chemoembolization for Hepatocellular Carcinoma: A Single-Center Experience.2015
Author(s)
Minami Y, Minami T, Chishina H, Arizumi T, Takita M, Kitai S, Yada N, Hagiwara S, Tsurusaki M, Yagyu Y, Ueshima K, Nishida N, Murakami T, Kudo M.
-
Journal Title
Oncology
Volume: 89
Pages: 27-32
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Evaluation of ART Scores for Repeated Transarterial Chemoembolization in Japanese Patients with Hepatocellular Carcinoma.2015
Author(s)
Arizumi T, Ueshima K, Iwanishi M, Minami T, Chishina H, Kono M, Takita M, Kitai S, Inoue T, Yada N, Hagiwara S, Ida H, Minami Y, Sakurai T, Nishida N, Kitano M, Kudo M.
-
Journal Title
Oncology
Volume: 89
Pages: 4-10
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
[Journal Article] Hepatic DNA Methylation Is Affected by Hepatocellular Carcinoma Risk in Patients with and without Hepatitis Virus.2015
Author(s)
Nishida N, Iwanishi M, Minami T, Chishina H, Arizumi T, Takita M, Kitai S, Yada N, Ida H, Hagiwara S, Minami Y, Ueshima K, Sakurai T, Kitano M, Kudo M.
-
Journal Title
Dig Dis
Volume: 33
Pages: 745-50
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Real-Life Clinical Practice with Sorafenib in Advanced Hepatocellular Carcinoma: A Single-Center Experience Second Analysis.2015
Author(s)
Arizumi T, Ueshima K, Iwanishi M, Chishina H, Kono M, Takita M, Kitai S, Inoue T, Yada N, Hagiwara S, Ida H, Minami Y, Sakurai T, Nishida N, Kitano M, Kudo M.
-
Journal Title
Dig Dis.
Volume: 33
Pages: 728-34
DOI
Peer Reviewed
-
-
[Journal Article] Early Viral Response Predicts the Efficacy of Antiviral Triple Therapy with Simeprevir, Peg-Interferon and Ribavirin in Patients Infected with Hepatitis C Virus Genotype 1.2015
Author(s)
Nishida N, Iwanishi M, Minami T, Chishina H, Arizumi T, Takita M, Kitai S, Yada N, Ida H, Hagiwara S, Minami Y, Ueshima K, Sakurai T, Kitano M, Kudo M.
-
Journal Title
Dig Dis.
Volume: 33
Pages: 708-14
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
[Journal Article] Genetic and epigenetic alterations of netrin-1 receptors in gastric cancer with chromosomal instability.2015
Author(s)
Toda K, Nagasaka T, Umeda Y, Tanaka T, Kawai T, Fuji T, Taniguchi F, Yasui K, Kubota N, Takehara Y, Tazawa H, Kagawa S, Sun DS, Nishida N, Goel A, Fujiwara T.
-
Journal Title
Clin Epigenetics
Volume: 7
Pages: 73
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
[Journal Article] Serum miR-21, miR-29a, and miR-125b Are Promising Biomarkers for the Early Detection of Colorectal Neoplasia.2015
Author(s)
Yamada A, Horimatsu T, Okugawa Y, Nishida N, Honjo H, Ida H, Kou T, Kusaka T, Sasaki Y, Yagi M, Higurashi T, Yukawa N, Amanuma Y, Kikuchi O, Muto M, Ueno Y, Nakajima A, Chiba T, Boland CR, Goel A.
-
Journal Title
Clin Cancer Res.
Volume: 21
Pages: 4234-42
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
-
-
-
[Journal Article] Involvement of heat shock protein a4/apg-2 in refractory inflammatory bowel disease.2015
Author(s)
Adachi T, Sakurai T, Kashida H, Mine H, Hagiwara S, Matsui S, Yoshida K, Nishida N, Watanabe T, Itoh K, Fujita J, Kudo M.
-
Journal Title
Inflamm Bowel Dis.
Volume: 21
Pages: 31-9
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
[Presentation] Epigenetics in HCC pathogenesis2015
Author(s)
Nishida N
Organizer
6th Asia-Pathific Primary Liver Cancer Expert Meeeting. Satellite 1. Basics, Genomics, Molecular Biology and Therapy
Place of Presentation
HYATT REGENCY, Osaka, Japan
Year and Date
2015-07-03 – 2015-07-05
Int'l Joint Research / Invited
-
-
-
-
-
