Wntシグナルを標的とした新たな抗線維化治療薬の開発

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09037
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Komagome Hospital (Clinical research laboratory)
• Principal Investigator: 木村 公則 東京都立駒込病院(臨床研究室), 肝臓内科, 部長 (70397339)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大澤 陽介 東京都立駒込病院(臨床研究室), 肝臓内科, 医長 (60447787)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 肝硬変 / 線維化 / wnt シグナル

Outline of Annual Research Achievements

国内で約20万人以上存在するHCV肝硬変、特にChild-Pugh (CP) score B以降の非代償性肝硬変に対する治療薬は存在せず予後不良であり、新たな治療薬開発は喫緊の課題である。肝硬変に対する治療薬（抗線維化薬）は現在実用化されていない。肝硬変の進行は、蛋白質合成などの肝臓の様々な機能の低下をもたらし、腹水や門脈圧亢進症等の合併症を誘発し治療に難渋することが多い。また肝硬変患者は、高率に肝細胞がんを発症することから、新規の線維化を標的とした肝硬変治療薬を開発することは重要な課題である。Wntシグナルは成体の分化、細胞増殖に関与しており、発癌のメカニズムに重要な因子の一つである。最近、WntシグナルがTGF-bを介して線維化にも関与していることが報告された。PRI-724は、Prism Pharmaが開発したWntシグナル伝達を阻害しβ-カテニンとCREB-　binding proteinの蛋白相互作用を選択的に阻害できる化合物である。現在、米国で大腸癌等の固形腫瘍に対してがん臨床試験が開始されている。研究代表者らはHCV蛋白発現肝線維化マウスを用いてPRI-724の抗線維化作用を検討した結果、PRI-724投与群でコントロール群と比較し肝線維化像において著しい改善が認められた。また四塩化炭素および胆管結紮を用いた線維化モデルを用いても、PRI-724投与により抗線維化作用を認めた。PRI-724の作用機序として、肝星細胞の活性化を抑制することを見出し、Ly-6Clowマクロファージの関与を示した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

17ヶ月齢のHCV発現肝線維化マウスにPRI-724(1mg/kg)を42日間持続静脈投与し肝臓組織を観察したところ、PRI-724投与群ではコントロール群と比較して肝線維化像の著しい改善が認められた。同時に肝脂肪化、肝細胞索の異常構造等の組織所見も改善しておりほぼ正常組織の所見であった。PRI-724投与後肝臓内に活性化したマクロファージ、単球、好中球の増加を認め、肝臓内MMP-8の発現上昇を認めた。また肝臓ハイドロキシプロリンの定量をおこない、PRI-724投与後の低下を示し抗線維化作用を有することを確認した。四塩化炭素誘導肝線維化マウスにおいて、S100A4の発現は線維化を誘導した肝臓において発現が上昇し、PRI-724の投与により発現上昇が抑制された。この知見は肝線維化にWntシグナルが関与していることを示す結果であった。またPRI-724の投与により四塩化炭素投与後8週の肝臓組織像では、シリウスレッド染色およびヒドロキシプロリン量、α-SMA発現の上昇は抑制され、抗線維化作用を確認した。初代培養肝星細胞をプラスティックディッシュ上で培養すると活性化による形態の変化が認められるが、C-82の培養上清への添加により抑制された。さらに、collagen α1(I), α-SMA, TIMP-1 mRNA発現の上昇も抑制された。

Strategy for Future Research Activity

HCV-Tgモデルマウスを用いた、PRI-724の腹腔内投与経路および静脈内投与経路での薬効薬理試験を行い、投与量及び投与間隔の最適化検討を行う。抗線維化のメカニズムとしてミトコンドリアの機能に着目し解析を進めたい。

Causes of Carryover

研究計画に記載した肝臓組織の解析を行う予定のサンプル作成に時間を要したため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

肝線維化モデルを用いてPRI-724投与後の肝組織におけるミトコンドリア機能の解析