2016 Fiscal Year Research-status Report
プロトン感知性受容体OGR1の慢性気道炎症、気道分泌への関与に関する研究
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15K09213
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
石塚 全 福井大学, 学術研究院医学系部門, 教授 (50302477)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 気管支平滑筋細胞 / ステロイド / ＮＦ－ｋＢ / ＡＰ－１ / プロトン / ＩＬ－８ / 遺伝子転写 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト気管支平滑筋細胞（BSMC)を細胞外pH6.3によるプロトン刺激を行い、プロトン刺激によるIL-8産生に対するデキサメタゾン（DEX)の抑制効果とその細胞内メカニズムを検討した。併せて、他の細胞内シグナル伝達因子のIL-8産生への関与についても検討した。プロトン感知性G蛋白質共役型受容体GPCRの１つOGR1(ovarian cancer G prptein coupled receptor1)の発現をsiRNAを用いてノックダウンした細胞ではプロトン刺激によるIL-8産生が抑制された。また、DEXは濃度依存性にプロトン刺激によるIL-8産生を抑制し、DEXのプレインキュベーションは30分で十分であり、プレインキュベーションがなくても、有意な抑制が観察された。プロトン刺激によって活性化し、IL-8産生に関与すると思われる、NF-kBとAP-1ファミリーの転写因子に関して、検討を加えた。プロトン刺激では対照として用いたTumor necrosis factor-alpha(TNF)に比べて、弱いもののNF-kB p65のリン酸化が確認された。IkappaB kinase (IKK)の阻害薬を用いるとプロトン刺激によるIL-8産生は完全に抑制されることより、NF-kBの活性はIL-8産生に必須であると予想された。DEXはp65のリン酸化や核蛋白内p65のコンセンサスDNA配列への結合増加を抑制しなかった。一方、BSMCをプロトン刺激した後、核から蛋白質を抽出し、AP-1コンセンサスDNA配列への結合を調べると、JunB及びJunDの結合増加がみられ、DEXはJunB及びJunDの結合を抑制した。siRNAを用いてJunDをノックダウンした細胞では、プロトン刺激によるIL-8産生が有意に抑制されたことより、DEXによるIL-8産生抑制にJunDの関与が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ヒト気管支平滑筋細胞（BSMC)を用いて、OGR1介するプロトン刺激によるIL-8産生に対するグルココルチコイド（デキサメタゾン、DEX)の抑制メカニズムを転写因子を中心に解析することができ、DEXの作用機序を部分的ではあるが解明することができた。この点において、本研究は概ね順調に進展していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後さらに、ヒト気管支平滑筋細胞を用いて、プロトンで刺激した場合にグルココルチコイド（デキサメタゾン、DEX）がJunDのAP-1コンセンサスDNA配列への結合をどのような機序で抑制しているのか、また、プロトン刺激によってJunDのリン酸化、核内への移行がどのような細胞内シグナル伝達経路を介してなされるのかの２点を中心に研究を進める。さらに、TNF刺激とプロトン刺激によるAP-1ファミリーの転写因子の活性化を比較すると、関与する転写因子が異なっているものと思われ、その差を明確にするとともに、TNF刺激によるAP-1ファミリーの活性化に対するDEXの効果についても併せて検討を進める。
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