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2016 Fiscal Year Research-status Report

デジタルPCRを用いた超高感度マルチプレックス変異検出法の確立とその臨床的検討

Research Project

Project/Area Number 15K09226
Research InstitutionWakayama Medical University

Principal Investigator

山本 信之  和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (60298966)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 洪 泰浩  和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (80426519)
赤松 弘朗  和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (10646582)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords分子標的治療 / 新規診断技術 / EGFR変異
Outline of Annual Research Achievements

肺がんはがん関連死の原因として高い割合を占める。特定の遺伝子変異を有する患者においては、分子標的薬剤が著効し、治療成績は向上している。しかしながら、de novo耐性変異等の低頻度変異アリルが存在する時の臨床像は不明であり、治療戦略は確立されていない。肺がんを分子生物学的レベルで解明し、さらなる個別化医療を進めるためには、より高感度な検出系を確立し、生物学的特徴および臨床像を解明する必要がある。本申請では、デジタルPCR 法を用いて承認薬剤の標的遺伝子変異を網羅する測定パネルを開発し、変異検出感度と精度の飛躍的な向上を実現することを目標にしている。加えて、低頻度変異アリル存在時の臨床像を解明し、肺がん個別化医療推進につなげることを目指している。
前年度から引き続き、標的となるEGFR遺伝子変異をクローニングしたプラスミドを用いて、複数の遺伝子変異を同時に検出できるデジタルPCRの測定パネルを確立に取り組んだ。具体的には3種類のEGFR遺伝子変異(L858R、Exon19 Deletion、T790M)を同時に検出する5つのパネル検出系の確立に取り組み、検出系をほぼ確立した。その上で本年度は主に上記EGFR遺伝子変異測定パネルを用いて患者検体での測定用のための臨床試験を実施した。既に組織検体での検討をほぼ終了し、検出用のカットオフ値の設定を行い、臨床研究用に利用することが可能な状態となっている。現在はさらに血液検体からの血漿DNAを用いての検討を実施しており、こちらについてもマルチプレックス化により主要な遺伝子変異の検出を可能とする予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

1.標的となるEGFR遺伝子変異をクローニングしたプラスミドを用いて、複数の遺伝子変異を同時に検出できるデジタルPCRの測定パネルを確立に取り組んだ。具体的には3種類のEGFR遺伝子変異(L858R、Exon19 Deletion、T790M)を同時に検出するパネル検出系の確立に取り組み、検出系をほぼ確立した。
2.上記の検出系を用いて臨床検体での検討を実施した。組織検体での測定を既に終えており、現在は血液検体からの血漿DNAを用いた測定を実施している。
3.第三世代EGFR阻害剤の耐性獲得機序として報告されている、EGFR C797S変異に対しての検出系の確立を目指し取り組みを開始した。

Strategy for Future Research Activity

血液検体からの血漿DNAを含む臨床検体を用いての検討を進めるとともに、耐性出現の早期予測及び治療効果との相関について評価を進める。具体的には、EGFR阻害剤を投与される患者において、治療開始後のEGFR変異アリル頻度の推移を経時的に観察することで、無増悪生存期間との関係を検討する予定である。また第三世代EGFR阻害剤の耐性の原因となるEGFR C797Sの検出系の確立を目指す。デジタルPCR法を利用した次世代シーケンシングについても引き続き検討を行う。本方法により少量の鋳型DNAの利用においても、網羅的な遺伝子変異解析が実現できる可能性がある。

Causes of Carryover

次年度使用額が生じた理由として、非常に精度高く検出を行うことができたため、当初の予定よりも大幅に確認のための再測定を減らすことができたことが挙げられる。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度にはさらなる臨床検体を用いての評価を予定しており、その測定に研究費を使用する。加えて、新規の標的の検出を予定しており、その検出系確立に用いる。

  • Research Products

    (22 results)

All 2016

All Journal Article (10 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 10 results,  Open Access: 1 results) Presentation (7 results) (of which Int'l Joint Research: 7 results) Book (5 results)

  • [Journal Article] Peripheral pulmonary carcinoid tumor diagnosed by endobronchial ultrasound guided bronchoscopy2016

    • Author(s)
      Tanaka A
    • Journal Title

      Respirol Case Rep

      Volume: 4 Pages: 10-12

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Differences in physical activity according to mMRC grade in patients with COPD2016

    • Author(s)
      Hayata A
    • Journal Title

      Int J Chron Obstruct Pulmon Dis

      Volume: 11 Pages: 2203-2208

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Applicability of the Japanese equation for estimating glomerular filtration rate in patients with advanced-stage thoracic cancer2016

    • Author(s)
      Kikuchi T
    • Journal Title

      Respir Investig

      Volume: 54 Pages: 479-483

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Afatinib versus Chemotherapy in Patients with Non-Small Cell Lung Cancer and Common Epidermal Growth Factor Receptor Gene Mutations and Brain Metastases2016

    • Author(s)
      Schuler M
    • Journal Title

      J Thorac Oncol

      Volume: 11 Pages: 380-390

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Feasibility study of chemoradiotherapy followed by amrubicin and cisplatin for limited-disease small cell lung cancer2016

    • Author(s)
      Sekine I
    • Journal Title

      Cancer Sci

      Volume: 107 Pages: 315-319

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Phase II study of erlotinib plus tivantinib (ARQ 197) in patients with locally advanced or metastatic EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer just after progression on EGFR-TKI, gefitinib or erlotinib2016

    • Author(s)
      Azuma K
    • Journal Title

      ESMO open

      Volume: 1 Pages: e000063

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Re-biopsy status among non-small cell lung cancer patients in Japan: A retrospective study2016

    • Author(s)
      Nosaki K
    • Journal Title

      Lung Cancer

      Volume: 101 Pages: 1-8

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Bevacizumab for non‐small‐cell lung cancer: A nested case control study of risk factors for hemoptysis2016

    • Author(s)
      Goto K
    • Journal Title

      Cancer Sci

      Volume: 107 Pages: 1837-1842

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A randomized, double-blind, phase II study of ramucirumab plus docetaxel vs placebo plus docetaxel in Japanese patients with stage IV non-small cell lung cancer after disease progression on platinum-based therapy2016

    • Author(s)
      Yoh K
    • Journal Title

      Lung Cancer 99: 186-193, 2016 20.Atagi S, Goto K, Seto

      Volume: 99 Pages: 186-193

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Erlotinib for Japanese patients with activating EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer: combined analyses from two Phase II studies2016

    • Author(s)
      Atagi S
    • Journal Title

      Future Oncol

      Volume: 12 Pages: 2117-2126

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Comparative analysis of PD-L1 expression between circulating tumor cells and tumor tissues in patients with lung cancer2016

    • Author(s)
      Koh Y,
    • Organizer
      IASLC 17th World Conference on Lung Cancer 2016
    • Place of Presentation
      Vienna, Austria
    • Year and Date
      2016-12-04 – 2016-12-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Phase II study of nimotuzumab + conrurrent chemoradiotherapy (CRT) for stage III non-small cell lung cancer (NSCLC): 5-year follow up results2016

    • Author(s)
      Hayakawa K
    • Organizer
      IASLC 17th World Conference on Lung Cancer 2016
    • Place of Presentation
      Vienna, Austria
    • Year and Date
      2016-12-04 – 2016-12-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Alectinib (ALC) versus Crizotinib (CRZ) in ALk-positive non-small cell lung cancer (ALK+ NSCLC): Primary results form phase III study (J-ALEX)2016

    • Author(s)
      Kim Y
    • Organizer
      IASLC 17th World Conference on Lung Cancer 2016
    • Place of Presentation
      Vienna, Austria
    • Year and Date
      2016-12-04 – 2016-12-07
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Comparison of PD-L1 expression between tumor tissues and circulating tumor cells and tumor tissues in patients with lung cancer2016

    • Author(s)
      Koh Y
    • Organizer
      EORTC-NCI-AACR
    • Place of Presentation
      Munich, Germany
    • Year and Date
      2016-11-29 – 2016-12-02
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] A prospective biomarker study using digital PCR method in EGFR mutated, advanced lung adenocarcinoma patients treated with afatinib2016

    • Author(s)
      Akamatsu H
    • Organizer
      American Association for Cancer Research Annual Meeting 2016
    • Place of Presentation
      New Orleans, Louisiana, USA
    • Year and Date
      2016-04-16 – 2016-04-20
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Differential expression of PD-L1 on circulating tumor cells in patients with advanced lung cancer2016

    • Author(s)
      Kim W
    • Organizer
      American Association for Cancer Research Annual Meeting 2016
    • Place of Presentation
      New Orleans, Louisiana, USA
    • Year and Date
      2016-04-16 – 2016-04-20
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Development of an automated device for size-based enrichment and isolation of circulating tumor cells in lung cancer patients2016

    • Author(s)
      Yagi S
    • Organizer
      American Association for Cancer Research Annual Meeting 2016
    • Place of Presentation
      New Orleans, Louisiana, USA
    • Year and Date
      2016-04-16 – 2016-04-20
    • Int'l Joint Research
  • [Book] デジタルPCRの原理と臨床腫瘍学での有用性2016

    • Author(s)
      赤松弘朗, 洪泰浩, 山本信之
    • Total Pages
      5
    • Publisher
      中外医学社
  • [Book] どのような肺がん患者に化学療法が行われるか2016

    • Author(s)
      赤松弘朗, 山本信之
    • Total Pages
      6
    • Publisher
      学研
  • [Book] 抗癌薬の副作用対策2016

    • Author(s)
      赤松弘朗, 山本信之
    • Total Pages
      2
    • Publisher
      南江堂
  • [Book] 分子標的時代における治療推奨の重みづけをどうするか?2016

    • Author(s)
      赤松弘朗, 山本信之
    • Total Pages
      5
    • Publisher
      中外医学社
  • [Book] 各種がんにおける化学療法 1肺癌2016

    • Author(s)
      赤松弘朗, 山本信之
    • Total Pages
      6
    • Publisher
      学研

URL: 

Published: 2018-01-16  

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