ＲＯＣＫ２によるポドサイト機能調節機構と糖尿病腎症への関与

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09277
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 宇都宮 一典 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (50185047)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 川浪 大治 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (50568889)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 糖尿病腎症 / ROCK2

Outline of Annual Research Achievements

今年度はROCK2 flox/floxマウスの樹立に成功した。また、糖尿病腎症におけるROCK2の役割について、in vitroでの検討を進めた。メサンギウム細胞において、transforming growth factor (TGF)-βが細胞外基質の産生を亢進させることで、糸球体硬化を形成する。この過程におけるROCK2の役割について検討を行った。メサンギウム細胞（MES-13）をTGF-βで刺激したところ、Rho-kinaseの活性化とともにCTGFの発現が亢進したが、Rho-kinase阻害薬Y-27632はこれらの発現を抑制した。さらに、Y-27632がTGF-β刺激に伴うNF-kBの核内移行を抑制することをWestern blotおよび免疫染色で確認した。Rho-kinaseはアクチン骨格の再構築を制御するが、この点に着目しNF-kB核内移行における役割について検討を進めた。siRNAを用いてROCK1、ROCK2をそれぞれノックダウンしたところ、ROCK2をノックダウンした場合にのみCTGFの発現が抑制された。近年、ROCK2特異的阻害薬としてSLx-2119が開発されている。我々はメサンギウム細胞において、ROCK2阻害薬SLx-2119はNF-kBの核内移行を抑制することをWestern blotおよび免疫染色で確認した。以上の結果から、Rho-kinaseはアクチン動態を介したNF-kBの核内移行によってCTGFの発現を制御することが明らかになった。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

遺伝子改変マウスの作製が当初より遅れているため

Strategy for Future Research Activity

今年度の研究で得られたROCK2flox/floxマウスをpodocin-Creと交配させて、ポドサイト徳的なROCK2欠損マウスの作製を進める。このマウスを用いて糖尿病モデルを作製し、ポドサイト機能に与える影響について解析を行う。また、メサンギウム細胞で確認されたROCK2による細胞外基質産生の制御機構がポドサイトにも存在するのか、in vitroでの検討も行う。

Causes of Carryover

in vivoの研究計画を遂行すべく、ROCK2flox/floxマウスを得るための交配に多くの時間を費やした。そのため、予定していたin vivoでの実験を実施できなかったことが要因である。今後、臓器特異的なCreマウスとの交配を進め、糖尿病モデルを用いた検討を行う予定である。

Research Products

• [Journal Article] Establishment of a myelinating co-culture system with a motor neuron-like cell line NSC-34 and an adult rat Schwann cell line IFRS1. (2018)
  • Author(s): Takaku S, Yako H, Niimi N, Akamine T, Kawanami D, Utsunomiya K, Sango K.
  • Journal Title: Histochem Cell Biol Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s00418-018-1649-x.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Effect of Novel Glucose Monitoring System (Flash Glucose Monitoring) on Mental Well-being and Treatment Satisfaction in Japanese People with Diabetes. (2018)
  • Author(s): Mitsuishi S, Nishimura R, Harashima SI, Kawamura T, Tsujino D, Koide K, Nishimura A, Utsunomiya K, Inagaki N, Atsumi Y.
  • Journal Title: Adv Ther Volume: 35 Pages: 72-80
  • DOI: 10.1007/s12325-017-0649-x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Primary Aldosteronism With Type 2 Diabetes Mellitus Requires More Antihypertensive Drugs for Blood Pressure Control: A Retrospective Observational Study. (2018)
  • Author(s): Ohashi K, Hayashi T, Watanabe Y, Hara K, Ukichi R, Asano H, Suzuki H, Yamashiro K, Tojo K, Sakamoto M, Utsunomiya K.
  • Journal Title: J Clin Med Res Volume: 10 Pages: 56-62
  • DOI: 10.14740/jocmr3233w.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Lactic-fermented egg white improves visceral fat obesity in Japanese subjects-double-blind, placebo-controlled study. (2017)
  • Author(s): Matsuoka R, Kamachi K, Usuda M, Wang W, Masuda Y, Kunou M, Tanaka A, Utsunomiya K
  • Journal Title: Lipids Health Dis Volume: 16 Pages: 237
  • DOI: 10.1186/s12944-017-0631-2.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] High Glucose Stimulates Mineralocorticoid Receptor Transcriptional Activity Through the Protein Kinase C β Signaling. (2017)
  • Author(s): Hayashi T, Shibata H, Kurihara I, Yokota K, Mitsuishi Y, Ohashi K, Murai-Takeda A, Jo R, Ohyama T, Sakamoto M, Tojo K, Tajima N, Utsunomiya K, Itoh H.
  • Journal Title: Int Heart J Volume: 58 Pages: 794-802
  • DOI: 10.1536/ihj.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Time-dependent effects of ipragliflozin on behaviour and energy homeostasis in normal and type 2 diabetic rats: continuous glucose telemetry analysis. (2017)
  • Author(s): Iuchi H, Sakamoto M, Matsutani D, Suzuki H, Kayama Y, Takeda N, Minamisawa S, Utsunomiya K.
  • Journal Title: Sci Rep Volume: 22 Pages: 351-354
  • DOI: 10.1038/s41598-017-12106-y.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Rho-Kinase Blockade Attenuates Podocyte Apoptosis by Inhibiting the Notch Signaling Pathway in Diabetic Nephropathy. (2017)
  • Author(s): Matoba K, Kawanami D, Nagai Y, Takeda Y, Akamine T, Ishizawa S, Kanazawa Y, Yokota T, Utsunomiya K.
  • Journal Title: Int J Mol Sci Volume: 18 Pages: 1795
  • DOI: 10.3390/ijms18081795.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] SGLT2 Inhibitors as a Therapeutic Option for Diabetic Nephropathy. (2017)
  • Author(s): Kawanami D, Matoba K, Takeda Y, Nagai Y, Akamine T, Yokota T, Sango K, Utsunomiya K.
  • Journal Title: Int J Mol Sci Volume: 18 Pages: 1083
  • DOI: 10.3390/ijms18051083.
  • Peer Reviewed / Open Access