2015 Fiscal Year Research-status Report
糸球体内皮・上皮細胞のカベオラを介すアルブミンの透過及びその抑制法の研究
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15K09278
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Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
Principal Investigator |
森山 能仁 東京女子医科大学, 医学部, 准講師 (20439821)
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Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | カベオラ / アルブミン / 糸球体内皮細胞 / 糸球体上皮細胞 / 初期エンドソーム / エンドサイトーシス / トランスサイトーシス / エキソサイトーシス |
Outline of Annual Research Achievements |
蛋白尿が出現する機序として重要な糸球体係蹄におけるアルブミンの濾過に関してはまだ不明な点が多い。これまで糸球体内皮細胞はfenestraeと呼ばれるdiaphragmを持たない孔が多数存在しており、アルブミンは自由に透過すると考えられてきた。しかし、実際の臨床では、子癇前症や血栓性微小血管症(TTP/HUS)のように糸球体内皮細胞障害がおこり糸球体内皮細胞の膨化によりfenestraeが縮小しアルブミンの通過が困難と考えられる病態でもアルブミン尿が認められることから、その他の経路の可能性も否定できななかった。 我々はこれまで糸球体腎炎において糸球体の係蹄、特に内皮細胞にカベオラが強く発現し、アルブミン尿の程度と相関すること、糸球体内皮細胞のカベオラを介し内皮細胞にエンドサイトーシスすることを証明し、糸球体内皮細胞に発現するカベオラがアルブミン尿の一因となり得る可能性を研究・報告してきた。さらに平成27年度はアルブミンの細胞内の通過経路として、まず初期エンドソームに取り込まれ、その後はライソソームで分解されることなく、ゴルジ体や小胞体にて修飾を受けることなく、また細胞骨格であるアクチンや微小管に沿うことなく、直接反対側に排泄されることを証明した。 これらによりアルブミンのカベオラを介するエンドサイトーシス、トランスサイトーシス、エキソサイトーシスが明確になり、新たなアルブミンの排泄経路としてカベオラ経路の存在の可能性が強く示唆される結果となった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまでにアルブミンの糸球体内皮細胞におけるカベオラを介すエンドサイトーシスを証明してきたが、平成27年度内の予定である細胞内のトランスサイトーシス、細胞外へのエキソサイトーシスに関してもさらに実験を進めることができた。 実際の研究方法として電子顕微鏡を導入し金コロイド標識したアルブミンを用い各オルガネラへの取り込みを直接観察することを試みたが、金コロイド標識アルブミンの描出が困難であったため、トランスウェルプレートを用いた実験に変更し、免疫染色による実験と併せてトランスサイトーシス、エキソサイトーシスを証明した。
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Strategy for Future Research Activity |
当初平成28年度は糸球体上皮細胞においてもアルブミンのカベオラを介するエンドサイトーシス、トランスサイトーシス、エキソサイトーシスを証明する予定であったが、他施設によりすでに報告されたため、さらに一歩進んで動物実験の導入を進めていく予定である。ピューロマイシンやアドリアマイシンによる腎炎のモデルマウスをまず作成し、カベオリン-1ノックアウトマウスにてアルブミン尿の減少効果が得られることやカベオラを阻害する薬剤によりアルブミン尿の減少効果が得られることなどを証明し、カベオラ経路のエビデンスのさらなる確立と薬物治療への応用を図っていく予定である。
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Causes of Carryover |
残高を確認しながら実験を進めほぼ当該年度の所要額を使用したが、わずかながら残高が生じた。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
当初の計画通り動物実験に移行しているが、腎炎モデルマウスの作成を確立し後、ノックアウトマウスや薬剤投与実験に移行していく。
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Research Products
(2 results)