セリンプロテアーゼ・ヘプシンの腎臓における生理的機能の分子解明

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09291
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 安達 政隆 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (90398206)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 向山 政志 熊本大学, その他の研究科, 教授 (40270558)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 水・電解質代謝学 / セリンプロテアーゼ

Outline of Annual Research Achievements

1)腎臓におけるヘプシン発現の局在検討
4週齢雄ラット腎ネフロンをマイクロダイセクションした後、RT-PCR(タカラバイオPrimeScript; One Step RT-PCR Kit Ver.2)を施行したところ、腎臓においてラットヘプシンmRNAの発現を確認した。また、ラット腎近位尿細管細胞(NRK52E)においてRT-PCRを施行したところ、ヘプシンmRNAの発現は観察されなかった。8週齢雄マウスの腎臓においてヘプシン抗体(Abcam ab27765)を用いたimmunohistochemistryを施行したが、ヘプシンを同定できず、現在、抗原賦活化処理を変更して再度、施行中である。

2)アフリカツメガエル卵母細胞系でのヘプシンによるNaPi-IIaリン輸送活性の測定
Ambion MEGAscriptを使用して作製したラットヘプシンおよびNaPi-IIa cRNAをXenopus oocyteに共発現させ、32Pのoocyteへの取り込みを測定する系を現在作製中である。NaPi-IIaのウエスタンブロット解析に関してもNaPi-IIa抗体を検討中である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

実験系の立ち上げに時間を要しており、また、抗体がワークしない等の問題点があり、遅れている。

Strategy for Future Research Activity

現在の問題点は明らかであるため、一つ一つの問題点に対して解決法を見出し、実験を遂行していく。