2015 Fiscal Year Research-status Report
神経毒性 Aβ oligomerの同定とこれを標的にした診断、治療法の開発
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15K09305
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| Research Institution | Hirosaki University |
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Principal Investigator |
瓦林 毅 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90186156)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | Abeta / oligomer / tau / fyn / sinaptosome / lipid rafts |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.モデルマウスの飼育．Abeta発現マウスTg2576およびTgCRND8の繁殖を行い，実験に必要な数を確保しつつある．尾のPCRによりそれぞれの遺伝子型の判定を行った.
2.マウス脳の抽出およびパラフィン切片の作製．学習障害の出現時期の前後で経時的にTg2576およびTgCRND8マウスを解剖し，半脳をTBS, 2% SDSおよび70%ギ酸で連続抽出し,各分画を得た．また脳をTriton-Xを含むbufferでhomogenizeし，不連続蔗糖勾配で超遠心してlipid rafts分画を含む各分画を得た．シナプス蛋白の解析のためにシナプトゾーム分画を経時的に採取した．半脳は4% paraformaldehydeで固定してパラフィン切片を作製した．
3.Abeta oligomer，シナプス蛋白および信号伝達系の解析．各脳分画中のAbeta oligomerをELISA，western blotで解析し，学習障害の出現時期に出現する神経毒性Abeta oligomerの選択を行い．TBS分画中のAbeta dimerが学習障害時期に初めに蓄積するAbeta oligomerであることを示した．その後Trimerの出現も認めた．一方，200 kD以上の高分子量のAbeta oligomerがTBS分画，SDS分画，ギ酸分画などで早期から認められた．信号伝達系蛋白のWestern blotによる検討を行い，早期からfyn cascadeの亢進が起こることを示した．シナプトゾームの解析からは，この分画にAbetaがprion蛋白とcomplexを形成して存在すること，リン酸化tauが誘発されることが示された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
解析に必要な量のマウスを確保しつつあり，最初の経時的検討に必要な脳分画，切片を採集した．学習障害時に出現するAbeta oligomerの解析を行い，神経障害性Abeta oligomerの候補を選びつつある．
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続きTgマウスの繁殖を行い，実験に必要な数を確保し，経時的なデータベースを作製する．
昨年の検討から選択した神経障害性Abeta oligomerの候補をTgマウス脳内に打ち込み，学習障害の出現の有無を調べる．解剖して脳および脳脊髄液中のAbeta oligomerおよび脳内のシナプス蛋白，信号伝達系の変化を検討する．
アルツハイマー病脳からこれらの神経障害性Abeta oligomerの候補が検出されるかどうかを検討する．
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